[发明专利]一种快速检测母猪胚胎存活的miRNA分子标志miR-145及其应用

说明书

本发明公开了一种microRNA‑miR‑145作为快速检测母猪胚胎存活的应用，所述miRNA分子标志物在胚胎存活数少的母猪子宫内膜组织中异常高表达，并通过组织的主动分泌过程分泌到血清中，随后通过检测大样本胚胎存活数少母猪血清miR‑145表达水平，发现血清miR‑145是一种可以快速检测母猪胚胎存活的分子标记物；本发明通过预测母猪胚胎存活率，尽早淘汰胚胎存活差的母猪，进而有效提高养猪企业的经济效益。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，涉及一种用于快速检测母猪胚胎存活的miRNA分子标记miR-145、miR-145的引物、试剂盒及检测方法。

背景技术

提高母猪产仔数可以提高母猪繁殖性能，进而有效提高养猪企业的经济效益。胚胎存活率是影响母猪产仔数的重要因素之一。在养猪生产，如何尽早淘汰胚胎存活差的母猪，成为了困扰生产者的一道难题。目前在生产中淘汰胚胎存活差母猪的方法主要通过观察母猪21天返情率和流产率实现。这种方法不仅费时费力，还会造成大量饲料和人力成本的浪费，给养猪生产的利益造成损失。因此我们亟需建立一种能在配种前快速检测母猪胚胎存活的方法。这将大大节约猪场生产成本，提高其经济效益。

母猪在怀孕期间胚胎和胎儿的损失大约30％～50％，其中超过75％的损失发生在配种后的前25d(即胚胎附植期)。研究发现围植入期子宫内膜发育不良是导致母猪怀孕后前30d胚胎损失的一个关键因素。miRNAs是一类长度为19-25个核苷酸非编码小RNA，在进化过程中高度保守、并在各组织细胞中特异性表达。越来越多研究发现miRNAs通过转录后调控基因表达参与多种生物学信号通路的调节，在很多与子宫内膜相关疾病的发生和发展过程中扮演极其重要角色，可以用来预测不孕、子宫内膜癌、子宫内膜异位等的分子标志物。越来越多研究证据已经表明miRNA作为一种调控因子在调节早期胚胎发育和胚胎存活等过程中发挥重要作用。有研究结果表明，血清中miRNA分子是由组织中的miRNA主动分泌而获得的，因此通过分析胚胎存活差母猪子宫内膜组织miRNA的表达谱，然后在血清中筛选差异表达的miRNA，将会是一种寻找母猪胚胎存活分子标记物行之有效的办法。

因此本发明根据上述思路开发了一种miRNA分子作为快速检测母猪胚胎存活的分子标志物，通过RT-PCR技术检测微量血清样品中这种分子标志物的表达水平来预测母猪胚胎存活。

发明内容

本发明针对上述存在的问题作出改进，提出一种用于快速检测母猪胚胎存活的miRNA分子标记。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明通过microRNA基因芯片从胚胎存活数少的母猪子宫内膜中筛选出异常高表达的microRNA，并通过realtime PCR验证，最终明确miR-145与胚胎存活高度相关，可以作为快速检测胚胎存活的标记物。

因为胚胎存活数少母猪子宫内膜中异常高表达的miR-145可以通过组织的主动分泌过程分泌到血清中，所以本发明重点分析了胚胎存活数少母猪血清miR-145的成熟体(其序列为5’-GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCUU-3’，如SEQ ID NO：1所示)的表达情况，首次发现血清miR-145可以作为快速检测母猪胚胎存活分子标志物进行应用。具体应用时，在母猪配种前半小时采集血样，采用Realtime PCR检测血清中miR-145的表达水平。若能检出，则该母猪应该被淘汰。

为实现上述目的，本发明提供了一种用于快速检测母猪胚胎存活的miRNA分子标记miR-145，所述分子标记的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，所述miRNA分子标记物在胚胎存活数少母猪子宫内膜组织中异常高表达，并通过组织的主动分泌过程分泌到血清中；分泌至血清中的核苷酸分子标记miR-145用于母猪胚胎存活的快速检测。

为实现上述目的，本发明还提供了用于检测所述分子标记miR-145引物对，其特征在于：核苷酸序列如下：