[发明专利]一种转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法有效
| 申请号： | 201510624838.2 | 申请日： | 2015-09-25 |
| 公开（公告）号： | CN105219853B | 公开（公告）日： | 2019-03-19 |
| 发明（设计）人： | 李奎;周荣;陶晨雨;郑新民;唐中林;任红艳;李训碧 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 栾波 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 sfat 基因 动物 环介导 等温 扩增 检测 方法 | ||
1.一种转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，以引物18F3、18B3、FIP、BIP、18LF和18LB对待检测模板进行环介导等温扩增，产物进行检测即可；
其中，18F3基因序列如SEQIDNo.1所示，18B3基因序列如SEQIDNo.2所示，FIP基因序列如SEQIDNo.3所示，BIP基因序列如SEQIDNo.4所示，18LF基因序列如SEQIDNo.5所示，18LB基因序列如SEQIDNo.6所示；
以25μl的环介导等温扩增的反应体系计，18F3和18B3均添加4.5-5.5pmol；FIP和BIP均添加35-45pmol；18LF和18LB均添加18-22pmol。
2.根据权利要求1所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，以25μl的环介导等温扩增的反应体系计，18F3和18B3均添加5pmol；FIP和BIP均添加40pmol；18LF和18LB均添加20pmol。
3.根据权利要求2所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述待检测模板在所述环介导等温扩增的反应体系中的质量不小于1.26ng。
4.根据权利要求3所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述待检测模板在所述环介导等温扩增的反应体系中的质量为1.26-126ng。
5.根据权利要求1所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述环介导等温扩增的反应体系的体积为10μl以上。
6.根据权利要求5所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述环介导等温扩增的反应体系的体积为15-30μl。
7.根据权利要求5所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述环介导等温扩增的反应体系的体积为25μl，该反应体系中的各成分为：20mM Tris-HCl，10mM KCl,10mM (NH4)2SO4，0.1％TritonX-100，0.8M甜菜碱，8mM MgSO4，1.4mM dNTPs, 8UBstDNA聚合酶，40pmol FIP和40pmol BIP，5pmol 18F3和5pmol 18B3，20pmol LB和20pmolLF，所述Tris-HCl的pH为8.8。
8.根据权利要求1-7任一项所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述环介导等温扩增的反应条件为：于60℃-65℃恒温反应55-65min。
9.根据权利要求8所述的转sFat-1基因动物环介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述环介导等温扩增的反应体系中还含有钙黄绿素。
10.根据权利要求9所述的转sFat-1基因动物介导等温扩增检测方法，其特征在于，所述钙黄绿素的添加量为：按所述环介导等温扩增的反应体系体积的3％-5％添加钙黄绿素显色液，所述钙黄绿素显色液含有0.5mM钙黄绿素和10mM氯化锰。
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