[发明专利]重组载体

权利要求书

1.一种重组可复制逆转录病毒，其包含：

逆转录病毒GAG蛋白；

逆转录病毒POL蛋白；

逆转录病毒包膜；

逆转录病毒多聚核苷酸，其包含：在所述逆转录病毒多聚核苷酸序列的3’端的长末端重复(LTR)序列、在所述逆转录病毒多聚核苷酸的5’端的启动子序列、gag核酸域、pol核酸域和env核酸域，所述启动子适合在哺乳动物细胞中表达；

包含可操作地连接于异源多聚核苷酸的内部核糖体进入位点的IRES盒和包含位于RNAi多聚核苷酸上游并可操作地连接于该RNAi多聚核苷酸的polIII启动子的polIII盒，其中所述IRES盒和polIII盒位于所述3’LTR的5’和编码所述逆转录病毒包膜的所述env核酸域的3’；和

在靶细胞中逆转录、包装和整合所必需的顺式作用序列，

其中所述env核酸域由SEQ ID NO:19或22的核苷酸编号6359到核苷酸8323的序列组成，和

所述3’LTR来源于γ逆转录病毒，所述3’LTR包括U3-R-U5域，并且所述3’LTR由如SEQID NO:19或22的核苷酸9405到9998所述的序列组成。

2.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述逆转录病毒多聚核苷酸序列从由选自以下各项组成的组的病毒被重组工程化：鼠白血病病毒(MLV)、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、猫白血病病毒(FeLV)、狒狒内源性逆转录病毒(BEV)、猪内源性病毒(PERV)、源于猫的逆转录病毒RD114、松鼠猴逆转录病毒、异嗜性小鼠白血病病毒相关病毒(XMRV)、禽网状内皮组织增生病毒(REV)或长臂猿白血病病毒(GALV)。

3.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述逆转录病毒包膜是双嗜性MLV包膜。

4.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述逆转录病毒是γ逆转录病毒。

5.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述靶细胞是具有细胞增殖失调的细胞。

6.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述靶细胞是赘生性细胞。

7.根据权利要求5所述的逆转录病毒，其中所述细胞增殖失调选自由肺癌、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、尿道癌、子宫癌、脑癌、头颈癌、胰腺癌、黑素瘤、胃癌和卵巢癌、类风湿性关节炎和其它自身免疫疾病组成的组。

8.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中在所述逆转录病毒多聚核苷酸的5’端的所述启动子序列与生长调节基因关联。

9.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中在所述逆转录病毒多聚核苷酸的5’端的所述启动子序列包括组织特异性启动子序列。

10.根据权利要求9所述的逆转录病毒，其中所述组织特异性启动子序列包含至少一个雄激素反应元件(ARE)。

11.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述启动子包括具有如SEQ ID NO:19、20或22的核苷酸1到核苷酸582所述的序列的CMV启动子，且可包含对一个或多个核酸碱基的修饰，所述启动子能引导和起始转录。

12.根据权利要求1所述的逆转录病毒，其中所述启动子包括CMV-R-U5域多聚核苷酸。

13.根据权利要求12所述的逆转录病毒，其中所述CMV-R-U5域包括与MLV R-U5区域连接的来自人类巨细胞病毒的立即早期启动子。