[发明专利]一种高纯度重组人脑利钠肽的制备方法

权利要求书

1.包含重组人脑利钠肽的融合蛋白，其特征在于，融合标签蛋白包括来源于大肠杆菌MrsB，该融合标签蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；融合标签蛋白通过包含酶切位点的接头融合至所述人脑利钠肽的N端，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述接头还包含柔性连接肽-(GGS)n-、组氨酸标签或其组合。

3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于：所述柔性连接肽的氨基酸序列为-HHHHHHGGSDDDDK-。

4.一种表达载体，其特征在于：包含编码权利要求1中所述核酸序列。

5.根据权利要求4表达载体，其特征在于：所述表达载体为pET系列载体。

6.根据权利要求5表达载体，其特征在于：所述表达载体为pET-28a-c(+)，或者pET29a，或者pET-30a-c(+)，或者pET39b(+)，或者pET-40b(+)，或者pET-41a(+)，或者pET-43.1a(+)。

7.一种表达如权利要求4或5所述表达载体的宿主菌。

8.根据权利要求7所述的宿主菌，其特征在于：该宿主菌为细菌或真菌。

9.根据权利要求8所述的宿主菌，其特征在于：所述宿主菌为大肠杆菌，该大肠杆菌为BL21(DE3)，或者BL21(DE3)P1ysS，或者TB1。

10.重组人脑利钠肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)权利要求1中所述的融合标签蛋白通过包含酶切位点的接头融合至核苷酸序列如SEQIDNO：1所示的人脑利钠肽的N端，得到融合蛋白核酸序列；

2)将步骤1)所获得的核酸序列克隆至表达载体构建重组载体；

3)培养能够表达权利要求1所述的融合蛋白的宿主菌，将步骤2)所述的重组载体用化学转染法转化至宿主菌；

4)诱导转化后的宿主菌表达重组人脑利钠肽；

5)纯化重组人脑利钠肽。

11.权利要求1中所述大肠杆菌MrsB的氨基酸序列作为融合标签蛋白在制备重组人脑利钠肽中的应用。