[发明专利]基于耐受极端条件的超氧化物歧化酶SOD、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于耐受极端条件的超氧化物歧化酶SOD，其特征在于，其为敏捷气热菌、沃氏嗜盐富饶菌、嗜酸热硫化叶菌的超氧化物歧化酶SOD，其氨基酸序列分别如SEQIDNO:4～6所示。

2.一种基于耐受极端条件的超氧化物歧化酶SOD的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)构建超氧化物歧化酶SOD的重组表达质粒

基于极端微生物编码的超氧化物歧化酶SOD基因序列，设计引物，扩增基因，并将基因克隆到原核表达载体，构建超氧化物歧化酶SOD重组表达质粒；

(2)重组表达超氧化物歧化酶SOD

将构建的超氧化物歧化酶SOD重组表达质粒转化大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)或Rosetta(DE3)，得到超氧化物歧化酶SOD重组表达菌株；再将其用诱导剂IPTG进行菌超氧化物歧化酶SOD诱导表达；

(3)亲和纯化表达的超氧化物歧化酶SOD

离心收集诱导表达超氧化物歧化酶SOD后的大肠杆菌，将菌体重悬于非变性蛋白裂解液，超声波破碎菌体，离心收集含有超氧化物歧化酶SOD的大肠杆菌裂解上清液；再利用固定化镍离子亲和纯化树脂从上清液中分别纯化超氧化物歧化酶SOD；

(4)检测超氧化物歧化酶SOD的酶活性和抗极特性

将纯化后超氧化物歧化酶SOD进行酶活性和抗极特性检测，从中筛选出耐受极端条件的的超氧化物歧化酶SOD。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述极端微生物选自敏捷气热菌(Aeropyrumpernix)、沃氏嗜盐富饶菌(Haloferaxvolcanii)或嗜酸热硫化叶菌(Sulfololbusacidocaldarius)中任意一种。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，基于极端微生物编码的超氧化物歧化酶SOD基因序列分别如SEQIDNO:1～3所示。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，原核表达载体为pET28质粒。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)中用诱导剂IPTG进行诱导培养的具体条件为：先将超氧化物歧化酶SOD重组表达菌株培养至OD₆₀₀＝0.4-1.0，再加入0.5mM诱导剂IPTG在37℃温度下培养3小时或22℃温度下培养12小时进行诱导表达。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中，所述非变性蛋白裂解液的组成如下：20mmol/LpH值为8.0的Tris-HCl,300mmol/LNaCl,0.5mmol/LDTT，10vol％甘油。

8.一种基于耐受极端条件的超氧化物歧化酶SOD在护肤品中的应用。