[发明专利]一种旋毛虫重组抗原及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种旋毛虫重组抗原及其应用。

背景技术

旋毛虫（Trichinellaspiralis）是一种危害严重的食源性人兽共患寄生性线虫，能够感染包括人类在内的150多种哺乳动物，呈世界性分布。旋毛虫病在我国被列为三大食源性人兽共患病之首（其余为囊虫病及棘球蚴病）。1964年以来，先后在西藏、云南、吉林、黑龙江、广西、四川和湖北等15个省（市、自治区）出现人旋毛虫病的暴发流行，病例达38700余起，死亡330余人。在畜牧业生产中，猪旋毛虫病不仅可以造成严重的经济损失，而且是肉类食品安全性的一个重要指标。我国每年用于猪旋毛虫病检验的费用高达15亿元，然而仍有大量出口猪肉由于该病的漏检而被退回，严重损害了我国肉产品安全性的国际形象。

目前，对于这种危害严重的寄生虫病，只有噻苯咪唑、甲苯咪唑等咪唑类药物可以治疗，但可引起毒副作用，表现为严重程度不一的食欲减退、发热、恶心、呕吐、荨麻疹、眩晕、颤抖、轻度失眠、脱发及可逆性肝损害等。目前，还没有有效的用于预防旋毛虫的疫苗和诊断旋毛虫病的特异的方法。因此，寻找新的疫苗候选抗原和药物靶点是防控该病的主要研究内容。

水孔蛋白（Aquaporins,AQPs）又叫做亲水孔蛋白，是一种位于细胞膜上的，能选择性高效跨膜转运水分子的水通道蛋白，属于主要内在蛋白（MajorIntrinsicProtein,MIP）家族成员。自从1991年首次在人的红细胞质膜中克隆、鉴定AQP1以来，目前已在病毒、细菌、真菌、原生动物、蠕虫、植物和哺乳动物中发现存在水孔蛋白。水孔蛋白在寄生虫中除了调节水通透性外，还参与寄生虫渗透压适应、营养物质转运及代谢废物排出等过程，研究发现寄生虫水孔蛋白还可以参与抗寄生虫药物的运输。水孔蛋白因在寄生虫生存中发挥重要的作用，并有望成为抗寄生虫疫苗候选分子和药物靶点，而受到广泛关注。但是，目前尚未有对旋毛虫水孔蛋白（TsAQP）作为疫苗候选分子和药物靶点的研究。

发明内容

本发明提供了一种旋毛虫重组抗原，其具有良好的免疫原性和反应原性，能够用于制备预防旋毛虫感染的疫苗。

本发明提供一种旋毛虫重组抗原，其包含由旋毛虫水孔蛋白（TsAQP）基因开放阅读框基因序列编码的氨基酸序列。

作为优选，其包含序列表SEQIDNo.4的氨基酸序列。

本发明还提供免疫原性组合物，其包含权利要求1或2所述的旋毛虫重组抗原。

作为优选，所述免疫原性组合物还包含佐剂或医学上可接受的载体或赋形剂；更优选地，所述佐剂为弗式完全佐剂和弗氏不完全佐剂。

本发明的第三个目的是提供一种疫苗，所述疫苗的有效成分为权利要求1或2所述的旋毛虫重组抗原或权利要求3-6任一所述的免疫原性组合物。

本发明的第四个目的是上述疫苗的制备方法，步骤如下：

（1）制备旋毛虫重组抗原；作为优选，用旋毛虫新生幼虫中制备旋毛虫重组抗原；

（2）将旋毛虫重组抗原与佐剂混合制剂，得到疫苗。

本发明的第五个目的是提供上述旋毛虫重组抗原、免疫原性组合物在制备预防旋毛虫感染的药物中的应用。

本发明的第六个目的是提供旋毛虫重组抗原的核酸。

本发明的第七个目的是提供包含权利要求8所述核酸的表达载体。

本发明的第八个目的是提供包含权利要求9所述表达载体的宿主细胞。

本发明的重组抗原具有良好的反应原性和免疫原性，能够用于制备预防旋毛虫感染的疫苗，具有良好的免疫效果。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1为重组表达质粒pET-30-NS1的双酶切鉴定。其中，M：DNA分子质量标准；1：pET-30-NS1重组表达质粒；2：pET-30-NS1重组表达质粒EcoRI和XhoI双酶切鉴定；

图2为纯化后的TsAQPP1重组蛋白电泳图；其中，M：蛋白分子质量标准；1-4：纯化后的TsAQPP1重组蛋白；

图3为TsAQPP1重组蛋白的West-blotting鉴定结果。其中，M：蛋白分子质量标准；1，3：佐剂对照组小鼠血清；2，4：TsAQPP1重组蛋白免疫血清；

图4为免疫小鼠血清抗体滴度的间接ELISA检测；