[发明专利]一种重组人3型腺病毒及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于重组病毒基因工程技术领域，具体涉及一种重组人3型腺病毒为载体的新型的肠道病毒71型（humanenterovirus71,EV71）-柯萨奇病毒A16型（CoxackievirusA16,CA16）-重组3型腺病毒(Had3)疫苗候选株及制备方法。

背景技术

手足口病（hand，footandmouthdisease，HFMD）是由人类肠道病毒引起的以发热和手、足、口腔部位的皮疹或疱疹性咽峡炎为主要临床特征的一种急性传染病。HFMD主要在5岁以下儿童中高发，该病主要是由肠道病毒71型（humanenterovirus71，EV71）和柯萨奇病毒A16型（CoxackievirusA16，CA16）两种病原体引起的。该病近些年在世界各地均有流行报道，虽然临床上可以使用药物对症治疗，但无法控制本病的流行传播，每年高发期都会有大范围的传染病例出现。疫苗的使用被认为是控制病毒传播的最佳方法。

人3型腺病毒（HAdV3）疫苗也在发展之中，其经肠道免疫一般不引起病症，HAdV3也可以作为经肠道黏膜免疫的载体使用，其六邻体的高变区可以插入15个氨基酸的外源片段，这样将具有免疫活性的抗原片段展示的人3型腺病毒粒子的表面，随着病毒的复制，含有抗原片段的重组子就会不断复制，并且展示到人3型腺病毒粒子的表面的抗原片段具有一定的空间构象，具有更好的免疫原性。

中国公开专利201310043885.9，公开一种重组人3型腺病毒及其制备方法和应用，公开了在重组人3型腺病毒上插入EV71中和表位SP70和SP55，其能够同时预防EV71感染和HAdv3感染的预防，但是对于预防手足病依然无法做到有效的预防。

发明内容

为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种重组人3型腺病毒，其具有可同时预防EV71和CA16，对预防手足口病有显著的效果。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种重组人3型腺病毒，所述人3型腺病毒六邻体上同时插入有EV71的中和表位SP70和CA16的中和表位VP1-1，所述EV71的中和表位SP70的氨基酸序列为YPTFGEHKQEKDLEYC,所述CA16的中和表位VP1-1的氨基酸序列为PKPTSRDSFAWQTAT。

其中，所述EV71的中和表位SP70的替换区为HAdv3六邻体的HVR1区，所述CA16的中和表位VP1-1的替换区为HAdv3六邻体的HVR2区。

其中，所述EV71的中和表位SP70的替换氨基酸序列为HVR1区的NRDNAV,所述CA16的中和表位VP1-1的替换氨基酸序列为HVR2区的TTEGEE。

一种人3型腺病毒-EV71-CA16的双价疫苗候选株，所述双价疫苗候选株含有权利要求1-3任一项所述的重组人3型腺病毒。

一种载体，所述载体包含上述的重组人3型腺病毒。

一种制备上述重组人3型腺病毒的方法，包括如下步骤：

在重组人3型腺病毒基因组E3区插入EV71的VP1蛋白表达框，人3型腺病毒六邻体上同时嵌入了EV71的中和表位SP70和CA16中和表位VP1-1，其中，所述EV71的中和表位SP70的氨基酸序列为YPTFGEHKQEKDLEYC，所述EV71的中和表位SP70的替换氨基酸序列为HVR1区的NRDNAV；所述的CA16中和表位VP1-1的氨基酸序列为PKPTSRDSFAWQTAT，所述的CA16中和表位VP1-1的替换氨基酸为HVR2区的TTEGEE。

一种重组人3型腺病毒的应用，所述双价疫苗候选株用于手足口病的预防。

本发明所提供的重组腺病毒，允许CA16中和表位个别氨基酸的缺失、替换或添加。但需要保持中和表位的免疫原性；允许被置换的HVR2区个别氨基酸的缺失、替换或添加，但需要保持腺病毒的稳定性，同时保证外源表位的免疫活性；本发明中嵌入的CA16表位不限于VP1-1，也可以是其他的保护性T细胞表位或B细胞表位，但需要保持腺病毒的稳定性和保证外源表位的免疫原性。

本发明的有益效果在于：本发明在六邻体衣壳上展示EV71中和表位的同时展示CA16的中和表位，该重组腺病毒可以产生抗CA16感染的免疫应答，多次免疫注射能加强免疫，该重组病毒可以同时预防EV71感染和CA16感染，对于预防手足口病具有显著的效果。

具体实施方式