[发明专利]一种印楝愈伤组织诱导不定根的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物的不定根组织培养及生产方法，特别是涉及一种印楝愈伤组织不定根的诱导方法。

背景技术

印楝属于楝科楝属，主要分布在印巴次大陆干旱地区的一种热带植物，可作为重要的植物源农药树种。从印楝中提取到的活性成分具有抑菌杀毒、抗肿瘤、抗癌、避孕、抗衰老等特性，被广泛应用于医药、农药、化妆品以及生态环境改良等多种领域。印楝素是其主要活性物质，存在于根、茎、叶和种子等各个部位，种子中含量最高，以其为主要成分制成的农药是目前药效最高，效果最好的产品，具有人畜无害、无污染、不易产生抗药性等特点。但是，印楝种子为一年生且产籽低，不同地区不同树的种子中印楝素含量不同，收集过程中损失较大，化学合成也不经济，不能够满足工农业日益增长的需求。

近年来，用农杆菌感染印楝外植体产生的发根生长迅速，其印楝素的含量比自然生长的印楝种子中高出很多倍，且在诱导的过程中涉及到外源基因的插入，在使用的过程中对于害虫的抗药性存在一定的风险。

目前，关于印楝愈伤组织诱导不定根的文献报道极少，因此，有必要提供一种简单新型的印楝愈伤诱导不定根的培养方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用印楝愈伤组织诱导不定根的方法。

本发明的技术方案概括如下：

一种印楝愈伤组织诱导不定根的方法，包括以下步骤：

(1)印楝愈伤组织的诱导：采集印楝叶灭菌后，切成小片段接种于固体培养基上，在无菌、温度为25-27℃及黑暗条件下培养3-5周，得到愈伤组织，并继代培养3-5次；

(2)印楝不定根的诱导：将愈伤组织接种到印楝不定根诱导培养基中培养，在无菌、温度为25-27℃、黑暗条件下培养3-5周，得到印楝不定根。

印楝愈伤诱导固体培养基为在MS培养基中加入吲哚丁酸、6-苄氨基嘌呤、蔗糖和琼脂，使吲哚乙酸的终浓度为2-3mg/L、6-苄氨基嘌呤的终浓度为1-2mg/L、蔗糖终浓度为30-40g/L、琼脂终浓度为6-7g/L，pH＝5.8-6.0。

印楝愈伤不定根诱导固体培养基为在MS培养基中加入萘乙酸、蔗糖和琼脂，使萘乙酸终浓度为0.05-0.3mg/L、蔗糖终浓度为30-40g/L琼脂终浓度为6-7g/L，pH＝5.8-6.0。

本发明的优点：

本发明利用组织培养方法培养印楝愈伤诱导不定根，其生长速度比自然生长较快，培养物较均一，且比农杆菌浸染印楝外植体产生发根诱导率高，不受外界地域条件的限制，工艺简单，成本低廉，重复性好。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。

不定根诱导率＝(愈伤组织不定根生根数/总接种愈伤组织数)×100％。

实施例1

固体培养基的制备：在MS培养基中加入吲哚丁酸、6-苄氨基嘌呤、蔗糖和琼脂，使吲哚乙酸的终浓度为2mg/L，6-苄氨基嘌呤的终浓度为1mg/L，蔗糖终浓度为40g/L，琼脂终浓度为6g/L，调pH＝5.8，在121℃，0.1Mpa压力的条件下灭菌25分钟，冷却至常温，备用。

实施例2

固体培养基的制备：在MS培养基中加入吲哚丁酸、6-苄氨基嘌呤、蔗糖和琼脂，使吲哚乙酸的终浓度为3mg/L，6-苄氨基嘌呤的终浓度为1mg/L，蔗糖终浓度为30g/L，琼脂终浓度为7g/L，调pH＝5.9，在121℃，0.1Mpa压力的条件下灭菌25分钟，冷却至常温，备用。

实施例3

固体培养基的制备：在MS培养基中加入吲哚丁酸、6-苄氨基嘌呤、蔗糖和琼脂，使吲哚乙酸的终浓度为2mg/L，6-苄氨基嘌呤的终浓度为2mg/L，蔗糖终浓度为35g/L，琼脂终浓度为7g/L，调pH＝6.0，在121℃，0.1Mpa压力的条件下灭菌25分钟，冷却至常温，备用。

实施例4

固体培养基的制备：在MS培养基中加入萘乙酸、蔗糖和琼脂，使萘乙酸的终浓度为0.3mg/L，蔗糖终浓度为40g/L，琼脂终浓度为6g/L，调pH＝5.8，在121℃，0.1Mpa压力的条件下灭菌25分钟，冷却至常温，备用。

实施例5

固体培养基的制备：在MS培养基中加入萘乙酸、蔗糖和琼脂，使萘乙酸的终浓度为0.05mg/L，蔗糖终浓度为30g/L，琼脂终浓度为7g/L，调pH＝5.9，在121℃，0.1Mpa压力的条件下灭菌25分钟，冷却至常温，备用。

实施例6