[发明专利]同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组

说明书

本发明公开了一种同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组。本发明提供的引物组，由引物对TY和引物对β组成；所述引物对TY由名称为TY‑F的引物和名称为TY‑R的引物组成；所述TY‑F为序列表中序列1所示的单链DNA；所述TY‑R为序列表中序列2所示的单链DNA；所述引物对β由名称为β‑F的引物和名称为β‑R的引物组成；所述β‑F为序列表中序列4所示的单链DNA；所述β‑R为序列表中序列5所示的单链DNA。实验证明，本发明提供的方法可准确的检测番茄黄化曲叶病毒和/或越南卫星DNAβ。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组。

背景技术

双生病毒(Geminivirus)是一类具有孪生颗粒形态的单链环状植物DNA病毒，在世界范围内广泛发生，并已在多种作物上造成毁灭性危害。自20世纪90年代起，在中国的云南、广西、广东和福建等南方各省(区)该病毒病害危害日趋严重。番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV)和中国番木瓜曲叶病毒(Papaya leaf curlChina virus，PaLCuCNV)都属于双生病毒科(Geminiviridae)菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)成员，番茄黄化曲叶病毒于20世纪50年代末始发于以色列，目前已在全世界40多个国家和地区大面积暴发，自20世纪90年代传入我国以来，由南向北、自东向西迅速全国性蔓延，已在台湾、广东、广西、浙江、江苏、上海、云南、四川、陕西、山东、安徽、河北、天津和北京等20多个番茄主产区大范围发生，特别是对我国北方秋茬保护地和南方露地番茄生产造成了极其严重的损失。

双生病毒分为四个属，玉米线条病毒属、甜菜曲顶病毒属、番茄伪曲顶病毒属和菜豆金色花叶病毒属。菜豆金色花叶病毒属多数为双组份基因组，即DNAA和DNAB。少数为单组份基因组，其基因组结构只有DNAA。有些单组份菜豆金色花叶病毒属病毒成员常伴随有其它小分子卫星DNA，包括卫星DNAβ及卫星DNAα等，被伴随的这些菜豆金色花叶病毒属病毒称为辅助病毒，DNAβ已被证明为致病因子，能够影响辅助病毒在寄主中的积累，又是引起典型症状不可缺少的因子，它与辅助病毒之间没有序列同源性，并且必须依赖于辅助病毒进行复制、包裹和移动。在田间自然发病的植株中，这些单组份双生病毒常与其伴随的卫星DNA形成病害复合体，有的伴随一种卫星DNA，有的伴随两种，例如双生病毒/DNAβ病害复合体、双生病毒/DNAα病害复合体、双生病毒/DNAβ/DNAα病害复合体等。

番茄黄化曲叶病毒属于菜豆金色花叶病毒属病毒，是一种单组份双生病毒。番茄植株感染番茄黄化曲叶病毒病后，初期主要表现为生长迟缓或停滞，植株节间变短，植株明显矮化，叶片变小变厚；叶质脆硬，叶片有褶皱、向上卷曲，叶片边缘至叶脉区域黄化，植株上部叶片症状比较典型，下部老叶症状不明显。由于番茄黄化曲叶病毒和越南卫星DNAβ有潜在的致病力增强的威胁，且复合侵染的产区正在扩大，开发能同时检测两种成分的特异、简便和灵敏的方法对这种病害的新疫情的早期预警和及时防控具有现实意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种同时检测番茄黄化曲叶病毒和/或越南卫星DNAβ的方法。

为解决上述问题，本发明首先提供了引物组。

本发明所提供的引物组，由引物对TY和引物对β组成；

所述引物对TY由名称为TY-F的引物和名称为TY-R的引物组成；所述TY-F为序列表中序列1所示的单链DNA；所述TY-R为序列表中序列2所示的单链DNA；

所述引物对β由名称为β-F的引物和名称为β-R的引物组成；所述β-F为序列表中序列4所示的单链DNA；所述β-R为序列表中序列5所示的单链DNA。

所述引物对TY也属于本发明的保护范围。