[发明专利]一种无刺黑莓杂交种质培育及分子辅助鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于植物杂交育种技术领域，具体涉及黑莓品种间杂交育种及其分子标记辅助鉴定方法。

背景技术

黑莓（Blackberry）为蔷薇科悬钩子属（RubusL.）的一种特色浆果类果树，其果实富含维生素E、花色苷和酚类物质，成为极具发展潜力的特种经济林树种。我国含有以黑莓和树莓为代表的丰富的悬钩子属植物资源，但由于对其果实研究起步较晚，致使适于生产的新品种极少。

国内目前黑莓主要栽培品种基本上引自欧美国家，这些品种大多通过杂交手段育种得到，一些性状优良品种引进国内后存在有刺不便人工管理、果熟期遭遇高温多雨天气致使果实品质差、产量低等问题。目前国外对适于生产的优良新品种的产权保护尤为重视，国内已很难引进理想的品种类型，培育具有自主知识产权的黑莓新品种迫在眉睫。国内黑莓育种工作近几年才逐渐得到重视，但由于悬钩子植物遗传背景较为复杂及不同倍性种质的亲和性较低致使普通常规育种工作进展较慢，建立一套高效的杂交育种方法、对引进黑莓品种进行种质改良显得尤为必要。SSR（SimpleSequenceRepeats）又称简单序列重复，是20世纪80年代发展起来的一种新型DNA标记，具有可靠性强、重复性好、多态性丰富、呈共显性等优点，在不同树种上被广泛用于优株辅助选择、亲本确认、资源比较鉴定及品种鉴定等。在江苏现有表现较好的黑莓引进品种中，Kiowa品种具有生长量最大、单果最重和产量最高的特性，唯一缺点是枝蔓有刺，Hull品种高产果优但果实较小，因此通过相同倍性的品种间杂交，有望选育出生长量大、单果重高、产量高的优质无刺黑莓杂交新品种。

黑莓为自交授粉结实类型，当雄蕊外露散粉时已完成授粉过程。要进行杂交配制，掌握合适的开花授粉时间非常必要。根据申请人多年开展黑莓杂交育种工作发现，花瓣从萼片中外露后2天即可完全完成授粉。因此，在看到花瓣外露后花药并不散粉，此时进行去雄即可避免自交授粉。基于此，申请人总结出一套有效的杂交育种及其杂交优株SSR标记辅助鉴定技术，该体系的建立对于培育具有自主知识产权的黑莓新品种和促进我国黑莓产业的持续发展具有重要意义。

发明内容

1、本发明的目的在于提供一种无刺黑莓杂交种质培育及分子辅助鉴定方法。

2、为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：在4月下旬以后黑莓品种花苞初始显露花瓣期间，在晴天上午8:00~10:00点剥开即将开放的花蕾去除雄蕊后套袋。下午3:00~5:00点取即将开放的花蕾，带回室内用双面刀片将花药轻轻剥离花丝，置于防水透气的硫酸纸上常温干燥2d以充分散粉，之后将花药和花粉收集于密封干燥瓶中。2~3d后，将套袋花序解开，待雌蕊柱头呈青绿色且有亮光光泽时，将已经散出粉的花粉用毛笔尖轻轻刷到柱头上使其充分授粉，操作完成后继续套袋。套袋1个月左右后，检查果实成熟情况，适时采集果实防止掉落。收获后将果实用果胶酶浸泡，洗出种子，在晴天通风处阴干后冷藏，于12月初低温沙藏。于第2年3月初整地播种，加强墒情查看和除草管理，获得黑莓品种间杂交后代幼苗。第3年2~3月将杂交后代幼苗及其亲本一同移栽和定植，冬季营养生长停止时调查比较生长量和病虫害抗性情况。第4年2月开始，密切观察杂交幼苗物候期、开花情况和结实情况，果实收获后测定营养成分，初步优选出优点突出的杂交优株，同时利用SSR分子标记将杂交优株进行真实性鉴定，确定亲本来源。第5年开始连续3年将第3年同步扩繁的优株进行区域试验和生产试验评价，获得适应性强的性状优于双亲的杂交黑莓新品种（系）。

由于目前未见无刺黑莓杂交育种种质培育研究的报道，本发明首次对黑莓的杂交育种技术进行了探索，发明了一种适于无刺黑莓新种质创制的新技术。

附图说明

1、图1：黑莓无刺杂交新品系‘6-6-3’无刺结果穗枝条与其有刺亲本‘Kiowa’比较；

2、图2：黑莓无刺杂交新品系‘6-6-3’及其双亲亲本果实特征；

3、图3：亲本多态性引物鉴定无刺黑莓杂交品系‘6-6-3’亲本来源；

P4-P61为12对有多态的引物，3个甬道为同一组，分别扩增的是母本‘Kiowa’、父本‘Hull’和‘6-6-3’的基因组DNA。M，50bpDNAladder。

具体实施方式

实施例1.无刺黑莓杂交种质培育及分子辅助鉴定方法

1、黑莓品种间杂交组合配制

1）去雄套袋