[发明专利]一种利用单针藻生产微藻油脂的方法有效
| 申请号： | 201510635066.2 | 申请日： | 2015-09-30 |
| 公开（公告）号： | CN106554976B | 公开（公告）日： | 2019-12-13 |
| 发明（设计）人： | 廖莎;孙启梅;王鹏翔;师文静;李晓姝;樊亚超;张霖;高大成;王领民;乔凯 | 申请（专利权）人： | 中国石油化工股份有限公司;中国石油化工股份有限公司抚顺石油化工研究院 |
| 主分类号： | C12N1/12 | 分类号： | C12N1/12;C12R1/89 |
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| 地址： | 100728 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 藻细胞 单针 微藻培养基 富含 葡萄糖 对数生长期 微藻种子液 种子液接入 保藏 焦磷酸酶 静置沉降 连续光照 微藻油脂 油脂积累 培养基 高油脂 上清液 稳定期 抑制剂 微藻 制备 后排 增殖 生产 | ||
1.一种利用单针藻生产微藻油脂的方法，其特征在于包括如下内容：
（1）制备微藻种子液，所述的微藻为单针藻（
（2）将单针藻种子液接入富含N元素的微藻培养基中，培养到对数生长期停止，静置沉降后排出上清液，获得藻细胞；所述的富含N元素的微藻培养基是指在常规微藻培养基中加入无机氮NaNO3、NH4NO3、NH4Cl中的一种或几种，加入量为2.0-5.0g/L；
（3）将步骤（2）得到的藻细胞接入低含N元素的微藻培养基中，并在培养基中添加ADP葡萄糖焦磷酸酶抑制剂，连续光照培养至稳定期，获得富含油脂的藻细胞；所述的低含N元素的微藻培养基是指在常规微藻培养基加入无机氮NaNO3、NH4NO3、NH4Cl中的一种或几种，加入量为0-0.5g/L。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）制备微藻种子液采用的微藻培养基为BG11、SE、TAP或D1淡水微藻培养基，微藻种子液是指将微藻接入培养基后培养至对数生长期获得的藻液。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤（1）的具体培养条件如下：温度25-30℃，通气量0.1-1.0vvm，CO2含量为1%-3%（v/v），搅拌转速50-200rpm，pH 6.0-9.0，光照强度为1000-10000lux，光暗比10:14 -14:10。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述的ADP葡萄糖焦磷酸酶抑制剂采用无机磷酸盐，加入量为1-10mmol/L。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的无机磷酸盐为焦磷酸钠、焦磷酸钾或酸式焦磷酸钠中的一种或几种，加入量为2-5mmol/L。
6.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于：步骤（3）在培养基中同时加入乙酰辅酶A羧化酶激活剂，加入量为1-200mmol/L。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述的乙酰辅酶A羧化酶激活剂是在培养基中新添加柠檬酸或金属离子激活剂，加入量为30-50mmol/L；或者是提高低氮微藻培养基中的柠檬酸、柠檬酸铁铵或MnCl2的含量，提高1%-10%。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）所述的微藻培养采用以下方式：温度25-30℃，通气量0.1-1.0vvm，CO2含量为3%-5%（v/v），搅拌转速50-200rpm，pH 7.0-8.0，光照强度为1000-10000lux。
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