[发明专利]一种快速繁殖茅苍术试管苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物的栽培技术领域，具体涉及一种高效快速繁殖茅苍术试管苗的方法。

背景技术

茅苍术(Rhizoma Areactylodis Lanceae)，也称之为南苍术，为菊科植物，喜凉爽较干燥气候，怕高温高湿，表面灰棕色，有皱纹、横曲纹及须根痕，顶端具茎痛。质坚实，断面黄白色或灰白色，有多数红棕色油室。主要分布于江苏、湖北和河南等省份，江苏茅山地区是茅苍术道地药材的产区。气香特异，味微甘、辛、苦，具有燥湿健脾、祛风散寒、明目作用。主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒感冒、脾胃不和，泄泻、湿热证、湿痹和日疾、暑温、痢疾、时行外感、黄白带下等症。由于苍术主产区常年不规范采挖，野生资源逐年下降，加上国家加大了野生药材的保护政策，限制采挖、运输，导致苍术的市场资源量逐年减小，同时，苍术的应用却越来越广泛，供应缺口逐年加大，因此人工栽培成了一条扩大供应的重要途径，但在栽培中苍术种子成苗率低，长期无性繁殖导致其药用价值退化，病害加重，产量下降，利用组培方式进行茅苍术种苗繁殖和复壮，有广阔市场前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高效快速繁殖茅苍术试管苗的方法，以解决现有技术存在的成苗率低，长期无性繁殖导致其药用价值退化等问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种高效快速繁殖茅苍术试管苗的方法，它包括如下步骤：

(1)以茅苍术成熟种子为外植体，用去污剂清洗10min，再用流水冲洗10min，带入接种室，在超净工作台上用75％体积分数的乙醇水溶液浸泡45～60s，再放置于消毒剂中浸泡15～20分钟，最后用无菌水冲洗3～5次。

(2)将经步骤(1)处理后的茅苍术种子接种于愈伤组织诱导培养基上，经15天暗培养后，正常培养10～15天；正常培养结束后，茅苍术种子萌发并被诱导成直径0.2～0.4cm的茅苍术愈伤组织；

(3)将步骤(2)中得到的茅苍术愈伤组织置于愈伤组织继代增殖培养基中培养20～25天；经该阶段培养后，愈伤组织达到0.6～0.8cm，且质地较硬，表面呈现绿色，易于分化；

(4)将经步骤(3)培养后的茅苍术愈伤组织接种到分化培养基中培养60～70天，培养结束后，茅苍术愈伤组织分化形成完整的不定芽，每个愈伤组织块形成5～8个不定芽，；

(5)将步骤(4)中所得的茅苍术的完整不定芽，转接到壮苗生根培养基中培养50～60d，培养结束后，茅苍术的完整不定芽形成完整健壮的茅苍术小苗；

(6)选取步骤(5)中得到的苗高5～7cm，带有4～5条健壮的根的茅苍术小苗移入温室内驯化培养10天，用水清洗去除培养基后，移植于铺有栽培基质的苗床上。

步骤(1)中，所述的去污剂为普通洗衣粉，所述的消毒剂为100ppm二氧化氯消毒剂；其中，优选的消毒剂为必洁仕牌二氧化氯消毒剂。

步骤(2)中，暗培养的条件为25～28℃，正常培养的条件为25～28℃，光照强度1000～1500勒克斯，光照时间为11～13h/d；其中，所述的愈伤组织诱导培养基的配方为：2,4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)1～3mg/L+激动素(KT)0.2～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+MS培养基+琼脂4.5～6g/L+pH 5.6～5.8；愈伤组织诱导培养基的优选配方为2,4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)1.5mg/L+激动素(KT)0.4mg/L+蔗糖30g/L+MS培养基+琼脂6g/L+pH 5.8。

步骤(3)中，培养条件为25～28℃下，光照强度度1000～1500勒克斯，光照时间11～13h/d；其中，所述的愈伤组织继代增殖培养基的配方为：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)0.5～1.5mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.2～0.5mg/L+蔗糖25～30g/L+MS培养基+蛋白胨0.5～1g/L+琼脂4.5～6g/L+pH 5.6～5.8；愈伤组织继代增殖培养基的优选配方为：2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)1.0mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA)0.3mg/L+蔗糖30g/L+MS培养基+蛋白胨0.5g/L+琼脂6g/L+pH 5.8。