[发明专利]一种高效快速繁殖三叶青试管苗的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物的栽培技术领域，具体涉及一种高效快速繁殖三叶青试管苗的方法。

背景技术

三叶青，学名：三叶崖爬藤(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)，又名金线吊葫芦、蛇附子、石老鼠，属鼠李目，葡萄科，崖爬藤属草质藤本。为我国特有药用植物，广泛分布于长江以南各省份,主要有浙江、江西、福建、湖南、湖北、广东、广西、贵州、重庆、四川、西藏、云南、海南和台湾等地区，常生于山坡林下的灌丛中或山谷溪边林下的岩石缝中，生长海拔300～1300m

三叶青全草均可入药，以地下块根和果实的药用效果最好。其性平、味微苦，具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛等功效，主治毒蛇咬伤、扁桃体炎、淋巴结结核、跌打损伤、小儿高热惊厥等疾病。目前临床上还应用于抗癌、抗艾滋病毒,治疗血液病、心脑血管疾病、肝炎、病毒性脑膜炎等疾病。

目前三叶青主要依赖于野生挖掘，近年来，由于过度采挖和生境破坏，致使铁三叶青野生资源已濒临灭绝，人工栽培已刻不容缓，但人工栽培存在种苗供应不足，通过组培的方法快速繁殖种苗有很大的市场价值。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高效快速繁殖三叶青试管苗的方法，以解决现有技术存在的栽培效率不高的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种高效快速繁殖三叶青试管苗的方法，它包括如下步骤：

(1)选取三叶青的枝条，去除叶片后剪成5～10cm的茎段，用去污剂清洗10min后，再用流水冲洗10min；将剪切冲洗后的三叶青茎段于体积分数为75％的乙醇水溶液中浸泡30～60s，再于氯化汞水溶液中浸泡5～8min；最后用无菌水冲洗3～5次后备用；

(2)将经步骤(1)处理后的三叶青茎段剪成带1～2个腋芽的小段，接种于固体培养基中；培养40～50天后腋芽萌发，摘取芽长1～2cm的腋芽备用；

(3)将步骤(2)中所得的腋芽置于增殖继代培养基中培养50～60d；培养完成后，三叶青腋芽生长成无根小苗且在茎节处产生腋芽；

(4)将步骤(3)中所得三叶青无根小苗剪成带1个腋芽的小段(或腋芽)并移至壮苗生根培养基中培养50～60天，得到三叶青成苗；

(5)选取步骤(4)中得到的4～5cm高，有2～3条根的三叶青成苗移到温室中，驯化培养10～15天后，用水冲洗去除培养基后，将三叶青成苗移栽到铺有营养土的苗床上，并遮阴保湿；待三叶青成苗的苗高达到15cm后，即可进行大田移栽。

其中，为了繁殖出足够多的可以进行步骤(4)中操作的三叶青无根小苗，可选取步骤(3)中所得的侧芽长度大于1cm的三叶青无根小苗重新剪成带1个腋芽的小段(或腋芽)接种于新的增殖继代培养基中，重复步骤(3)中的培养过程。每转接1次，增殖系数达3～4。当繁殖出足够数量的小苗时，将所得的三叶青无根小苗进行步骤(4)中操作。

其中，对于上述步骤中是选择带腋芽的小段还是腋芽接种于新的增殖继代培养基中，重复步骤(3)中的培养过程，根据三叶青无根小苗的实际生长情况而定。若无根小苗的基部腋芽较长，则剪取腋芽，若顶部腋芽较短，则剪取带1个腋芽的小段

步骤(1)中，所述的三叶青枝条为当年生半木质化茎段。

步骤(1)中，所述的去污剂为家用洗衣粉。

步骤(1)中，所述的氯化汞水溶液中，氯化汞的质量分数为0.1％～0.15％。

步骤(2)中，培养条件为22～25℃，光照强度为300～1000勒克斯，光照时间为11～13h/d；其中，所述的固体培养基的配方包括：6-苄氨基嘌呤0～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂4.5～6g/L+土豆汁60～80g/L+活性炭0.5g/L+MS培养基+pH 5.6～5.8；其中，固体培养基的优选配方为6-苄氨基嘌呤1.0mg/L+蔗糖30g/L+MS培养基+琼脂6g/L+土豆汁60g/L+活性炭0.5g/L+pH 5.8。