[发明专利]一种肝微粒体中4’-羟基美芬妥因浓度的UPLC/MS/MS检测方法

权利要求书

1.一种肝微粒体中4’-羟基美芬妥因浓度的UPLC/MS/MS检测方法，包括以下步骤：

(1)建立肝微粒体温孵体系，加入内标物和系列浓度的4’-羟基美芬妥因对照品，制备标准曲线样品；

(2)将标准曲线样品注入UPLC/MS/MS液质联用仪进行检测；

色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为0.1％甲酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液；

梯度洗脱条件：

运行时间为3分钟；

质谱条件如下：

离子源：电喷雾离子源；

检测方式：正离子多反应监测，监测的离子对为：4’-羟基美芬妥因的母离子-子离子对和内标物的母离子-子离子对；

根据检测结果得到4’-羟基美芬妥因的标准曲线；

(3)按照步骤(1)相同的方法，将底物S-美芬妥因与肝微粒体温孵体系共温孵，按照步骤(1)相同的方法制备得到含有内标物的待测样品，将待测样品注入UPLC/MS/MS液质联用仪，按照步骤(2)相同的条件进行检测，根据标准曲线得到待测样品中的4’-羟基美芬妥因浓度。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述内标物为邻甲苯海拉明。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，流动相的流速为0.3mL/min。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，柱温为40℃。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，色谱柱为ACQUITYUPLC-BEHC18色谱柱，规格为1.7μm,2.1×50mm。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述色谱条件中，进样量为2μL。

7.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于：所述正离子多反应监测中，4’-羟基美芬妥因的母离子-子离子对为m/z235.05→m/z150.01，锥孔电压为35V，碰撞电压为16V；邻甲苯海拉明的母离子-子离子对为m/z270.10→m/z181.08，锥孔电压为15V，碰撞电压为12V。

8.根据权利要求1-7任一项所述的检测方法，其特征在于：所述质谱条件中，毛细管电压为3000V，离子源温度为150℃，去溶剂化温度为350℃，去溶剂化气体流速为650L/h。

9.根据权利要求1-7任一项所述的检测方法，其特征在于：所述质谱条件中，锥孔气体流速为150L/h，雾化气压力为6.0bar。

10.根据权利要求1-7任一项所述的检测方法，其特征在于：所述步骤(1)的标准曲线样品制备方法为：将4’-羟基美芬妥因加入肝微粒体温孵体系，所述肝微粒体温孵体系包含肝微粒体、葡萄糖-6-磷酸、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、MgCl₂、PBS和NADP，再加入含内标的乙腈溶液，混匀，离心，取上清液，即得标准曲线样品。