[发明专利]物理-化学-生物预处理玉米秸秆的方法

权利要求书

1.物理-化学-生物预处理玉米秸秆的方法，该预处理玉米秸秆的方法包括以下步骤：

（1）物理处理：玉米秸秆先通过粉碎机进行粉碎，粉碎后过40目筛；

（2）化学处理：用质量浓度1.0%的NaOH溶液处理粉碎后的玉米秸秆，固液质量体积比为1：10，100℃1h，过滤，滤渣水洗至中性，烘干至恒重，作为发酵底物；

（3）生物处理：先制备每10mL含 FeSO₄·7H₂O 0.0005g、MnSO₄·7H₂O 0.0016g、 ZnSO₄·7H₂O 0.0014g、CoCl₂ 0.002g的微量元素混合液；其次制备营养溶液，营养溶液中各组分的质量百分比浓度是：(NH₄)₂SO₄ 1%，KH₂PO₄ 0.3%，MgSO₄ 0.05%，CaCl₂ 0.05%，其余是蒸馏水；接着制备混合液，混合液由每100mL营养溶液中添加微量元素混合液1mL制得；向步骤（2）的发酵底物中依料液质量体积比为1:2.25加混合液，调节pH5.5，在121℃灭菌20min，得固态发酵培养基；将配制成菌浓度为10⁶个/mL的黄孢原毛平革菌（ Phanerochaetechrysosporium ） 孢子悬浮液以体积质量百分比10%的接种量接入固态发酵培养基中，发酵10d；再以体积质量百分比10%-14%的接种量接入10⁶个/mL的纤维素降解菌孢子悬浮液，28 ℃培养3-5 d，得到预处理产物；所述的纤维素降解菌为黑曲霉(Aspergillusniger)、绿色木霉（Trichodermaviride）和Trichodermaasperelloides中的一种或几种；几种霉菌的混合体积比例分别为：黑曲霉:绿色木霉=1:1，黑曲霉:Trichodermaasperelloides=1:1，绿色木霉:Trichodermaasperelloides =1:1，黑曲霉:绿色木霉:Trichodermaasperelloides=1:1:1，黑曲霉:绿色木霉:Trichodermaasperelloides =2:1:1，黑曲霉:绿色木霉:Trichodermaasperelloides =1:2:1，黑曲霉:绿色木霉:Trichodermaasperelloides=1:1:2；所述的黄孢原毛平革菌利用综合PDA固体培养基进行活化，综合PDA培养基的制备过程是：在1L PDA固体培养基的基础上加入KH₂PO₄ 3g、MgSO₄ 1.5g、维生素B₁ 0.001g；所涉及到的微生物孢子悬浮液的制备方法为：将活化好的菌株用无菌水洗涤孢子，置于含玻璃珠的三角瓶中，在28 ℃120 r/min摇床振荡20 min，用4 层灭菌擦镜纸过滤振荡液，在显微镜下用血球计数板对滤液中孢子进行计数，调整其浓度至10⁶个/mL，保存在4 ℃冰箱备用。

2.根据权利要求1所述的物理-化学-生物预处理玉米秸秆的方法，其特征是：所述黑曲霉和绿色木霉采用PDA固体培养基进行活化，PDA培养基的制备过程是：将马铃薯洗净去皮后称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂，再用八层纱布过滤，加入15g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后加入20g葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000mL。

3.根据权利要求1所述的物理-化学-生物预处理玉米秸秆的方法，其特征是：所述的Trichodermaasperelloides采用麦芽汁固体培养基进行活化，麦芽汁固体培养基的制备过程是：称取一定质量麦芽，粉碎，加4倍于麦芽质量的水，55-60℃保温糖化，不断搅拌，糖化程度用碘滴定，经3-4h后，将糖化液用4-6层纱布过滤；过滤液用鸡蛋清澄清；方法是将一个鸡蛋清加水约20mL，调匀至产生泡沫为止，然后倒入糖化液中搅拌，煮沸后再过滤，即得澄清的麦芽汁；加水稀释成5-6°Bé的麦芽汁；麦芽汁中加16g琼脂，0.1MPa压力，灭菌15min，得麦芽汁固体培养基。