[发明专利]一种低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法

说明书

本发明涉及一种低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法，其包括如下步骤：（1）组织前处理：将结直肠癌组织经抗生素处理；（2）切块；（3）培养：将切好的组织块放入含抗生素的培养基中进行初期培养和正常培养，至细胞贴壁。本发明的方法对细胞损伤小、细胞存活率高、操作简便易培养。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法。

背景技术

结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤，近年来我国结直肠癌的发病率和死亡率呈逐年上升趋势。多数结直肠癌患者就诊时已属中晚期，治疗花费大、效果差、远期生存率低。同时给患者、家庭及社会带来了沉重的负担。结直肠癌具有较明显的癌前及癌症早期病变，且时间长达十余年。这为结直肠癌及癌前病变的早期发现和早期治疗提供了机会。肿瘤标志物的测定在肿瘤的诊断、疗效评估、检测复发和推测预后等方面起到重要的作用，对提高临床肿瘤诊疗水平具有重要的意义。

结直肠癌的发生是多基因变化过程，单一标志物筛查特异性和敏感性较低，难以应对大样本人群的筛查。国内外针对结直肠癌肿瘤标志物方面的研究虽然很多，但是目前应用于临床的结直肠癌肿瘤标志物——CEA、CA199、CA125、CA724等仍缺乏足够的灵敏性和特异性，寻找新的与结直肠癌发展进程密切相关的肿瘤标记物，对早期诊断及干预结直肠癌具有重要意义。但是迄今为止，尚未发现既灵敏又特异的肿瘤标志物可应用于临床结直肠癌的检测。因此，寻找有效肿瘤标志物作为初筛手段、进行结直肠癌早期筛查、早期诊治对阻断或延缓结直肠癌进展、改善患者预后和延长生存期具有重要意义。

通过对结直肠癌组织细胞与正常结直肠粘膜细胞表达蛋白的高通量筛选，有可能发现肿瘤组织与正常黏膜组织细胞蛋白表达谱的差异，进而发现新的肿瘤标志物。高通量筛选肿瘤细胞表达的蛋白则需要涉及到肿瘤细胞的原代培养，并且这种研究方法对原代培养细胞的培养要求很高，要尽量避免实验操作中导致的细胞破裂或细胞膜损伤。

原代培养即为直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养，在结直肠癌的研究中，癌细胞的原代培养未见报道采用机械破碎法直接生长，均采用传统的酶消化法，其前期对结直肠癌组织进行机械剪碎，然后向剪碎的组织中加入酶消化，使其分散成为单个细胞。

传统的酶消化法具有以下缺陷：由于消化时间的原因（一个样本只能选定相同的处理时间，比如以将略大的组织块消化成单一细胞为标准制定消化时间，必然造成较小的组织块及游离细胞的消化过度），会造成细胞消化不均匀甚至消化过度，损伤细胞膜，破坏细胞，影响细胞活性，或者消化不彻底不利于高通量筛选实验的进行；酶的种类繁多，在消化时选择酶的种类和浓度具有多变性，不同的组织其对酶的要求也不一样，需要复杂的条件摸索。

发明内容

基于现有技术的缺陷，本发明所要解决的技术问题是，提供一种对细胞损伤小、细胞存活率高、操作简便易培养的低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法。

本发明解决其技术问题采用的技术方案为：一种低损伤的结直肠癌细胞原代培养方法，其包括如下步骤：

（1）组织前处理：将结直肠癌组织经抗生素处理；

（2）切块；

（3）培养：将切好的组织块放入含抗生素的培养基中进行初期培养和正常培养，至细胞贴壁。

进一步的，步骤（1）将结直肠癌组织以无菌生理盐水冲洗，然后放入含抗生素的无血清培养基浸泡。

更进一步的，所述含抗生素的无血清培养基中抗生素为：500 U/mL 青霉素，500 μg/mL 链霉素，1.25 μg/mL 两性霉素B，80μg/mL 庆大霉素。

进一步的，步骤（2）切块为：将组织块放入细胞培养皿中，用无菌手术刀将组织切碎至体积1-50mm³，优选15-30mm³。