[发明专利]H9N2亚型禽流感病毒细胞高产疫苗株构建及应用

说明书

技术领域

本发明属于动物疫苗制备技术领域。具体涉及一株H9N2亚型禽流感病毒细胞高产 疫苗株构建及应用。

背景技术

H9N2亚型禽流感(Avianinfluenza，AI)是由A型流感病毒感染家禽后引起一种传 染性综合征，在世界范围内广泛传播，严重威胁着畜牧业的发展。1966年首次从火鸡中检测 H9N2亚型AIV，此后，AIV在禽类中广泛传播流行。1994年，我国首次报道从广东某鸡场中分 离到H9N2亚型AIV，而此后H9N2亚型AIV一直在我国的养禽地区广泛传播。H9N2亚型AIV虽然 属于低致病性AIV，但是现在研究表明它还可以感染小鼠，雪貂和人类。除此之外，可以引起 禽产蛋率下降、造成免疫抑制、以及激发其他病毒或细菌的混合或继发感染，给我国的养禽 业造成严重的经济损失。而且H5N1流感病毒的内部基因都有可能构成H9N2的内部基因，这 引起了人们对H9N2禽流感病毒的高度重视。1999年，在中国香港发生了人感染H9N2亚型AIV 事件。再到2009年12月，香港第7次在人身上检测出H9N2AIV。这表明，H9N2AIV可以从禽类到 哺乳动物跨越物种障碍进行传播，从而扩大了宿主范围。2013年，中国发生了H7N9禽流感病 毒感染人事件，导致134人感染和45人死亡。到2014年2月23日为止，总共有213人感染66人 死亡。根据禽流感病毒基因组比对和亲缘分析显示，H7N9病毒的6个基因片段来源于 H9N2AIV。这表明，H9N2有可能成为将来流行的一种病毒，应该引起高度的重视。因此，为了 人类健康和畜牧经济的健康发展，必须加强对H9N2亚型AIV的防控。

接种疫苗，是预防禽流感发生与传播最有效的手段。从1878年流感爆发到现在，鸡 胚灭活疫苗一直是预防禽流感发生的重要的疫苗之一。目前，我国使用的H9N2亚型AIV疫苗 均为鸡胚尿囊液灭活疫苗。鸡胚是禽流感疫苗生产和研究的主要材料。虽然鸡胚灭活苗具 有方便运输，制备工艺简单，安全稳定等优点，但是鸡胚培养流感病毒也存在如下许多弊 端:(一)在流感大规模爆发的时候，在短期内收集9-10日龄鸡胚甚是困难。(二)用鸡胚培养 流感病毒，容易产生大量废弃的鸡胚及其病毒的残留，排放到自然中对环境危害很大。(三) 受到母源抗体的影响；(四)生产成本高、周期性长等缺点。为了克服禽流感爆发时大量鸡胚 的短缺问题及生产周期长的缺点，通过利用反向遗传操作技术，改造病毒内部基因，提高 H9N2禽流感病毒在MDCK细胞中的增殖滴度。用细胞培养AIV的方法取代用鸡胚生产AIV疫苗 的方法，改变传统的方法，完善H9N2亚型禽流感疫苗灭活疫苗生产方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现在使用鸡胚培养禽流感病毒的传统方法，获得一种在细 胞上稳定增殖且具有高病毒滴度的细胞疫苗。

本发明的技术方案如下：