[发明专利]一种动物胶中的共有多肽及其在检测中的应用

说明书

本发明公开了一种动物胶中的共有多肽及其在检测中的应用。本发明所提供的共有多肽序列为Gly‑Ser‑Ala‑Gly‑Pro‑Hyp‑Gly‑Ala‑Thr‑Gly‑Phe‑Hyp‑Gly–Ala‑Ala‑Gly‑Arg，该多肽为驴、马、牛、猪、羊、鳖、乌龟、鹿等动物的胶原蛋白序列中所共有，受生产工艺的破坏程度与胶原蛋白多肽成分受工艺的破坏程度基本一致，因此，作为参考物或内标物进行质谱检测可以抵消不同生产工艺的破坏程度不同的影响，使含量测定更加准确，还能及时发现是否掺杂除驴、马、牛、猪、羊、鳖、乌龟、鹿等外的其他动物成分。

技术领域

本发明涉及一种动物胶中的共有多肽及其在检测中的应用，属于中药检测领域。

背景技术

动物胶为由动物的皮、骨等熬制而成胶类物质，常见的包括阿胶、龟甲胶、鹿角胶、鳖甲胶等。各种胶在药理、临床应用上各有特点，各种胶需用规定动物熬制，比如阿胶由驴皮熬制、黄明胶由牛皮熬制、龟甲胶由龟甲熬制等，否则视为伪劣产品。因各种胶价格差别很大、外观非常相似，市场上出现了造假、制假的不法分子。以阿胶为例，在生产阿胶时，部分甚至全部用各种其他动物皮包括马皮、牛皮、猪皮等，甚至脏皮、烂皮、病死动物之皮等来取代驴皮进行假阿胶的熬制，坑害消费者，谋取非法利益。

比较权威的动物胶的真伪鉴别方法主要为DNA分子鉴定法和特征性肽段的质谱检测方法，其中质谱方法已开始纳入国家标准中。已报道的文献中，对用马皮、牛皮、猪皮、羊皮、龟甲、鹿角等熬制的动物胶可以鉴别区分，然而很难发现掺杂其他动物为原料进行造假的情况。动物胶一般经长时间高温蒸煮浓缩，胶中的蛋白多肽遭到不同程度的水解破坏，对于不同工艺生产的动物胶，质谱检测方法在不同动物成分含量检测时产生的偏差较大。如能在动物胶中寻找各动物共有成分作为内标物或参考物，该成分若能在原料中含量相对固定，且受工艺的破坏程度与待检指标成分受工艺的破坏程度一致，则可以抵消工艺影响，达到对不同工艺的动物胶进行精确定量的目的，满足含量检测要求。此外，还可利用共有成分判断样品中是否掺杂其他成分、质谱检测过程中是否正常等问题。

发明内容

本发明针对上述问题，提供了一种通过检测共有多肽来鉴别动物胶真伪，同时检测动物胶中动物成分含量的方法，该方法操作简单，无需另添加标准物，可以抵消不同生产工艺的破坏程度不同、样品处理过程中酶解不完全等影响，达到精确定量；还能及时发现是否掺杂除驴、马、牛、猪、羊、鳖、乌龟、鹿等外的其他动物成分，质谱检测过程是否正常等。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明提出了一种动物胶中的共有多肽，该共有多肽为驴、马、牛、猪、羊、鳖、乌龟以及鹿的胶原蛋白中所共有，所述共有多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步的，基于上述共有多肽本发明还提出了一种鉴别动物胶真伪的方法，其包含以下步骤：

1)将已知真胶样品或对照样品及待检的动物胶样品分别采用胰蛋白酶酶切后，放入液质联用仪，设置特征性肽段检测成分后，设置共有多肽作为参考物质或内标物进行检测，所述共有多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

2)分别计算出真胶样品或对照样品中共有多肽的检测峰面积A₀、特征性肽段检测峰面积A₀′，真胶样品或对照样品的浓度C₀，待检的动物胶样品中共有多肽的检测峰面积A₁、特征性肽段检测峰面积A₁′，待检的动物胶样品的浓度C₁；

3)判断样品检测情况：

a.若A₀/C₀与A₁/C₁两者的值相当，即偏差在20％以内，则表明检测正常；