[发明专利]自体表皮细胞和成纤维细胞同时制备方法及其生物美容产品

说明书

技术领域

本发明涉及自体表皮细胞和成纤维细胞同时制备的方法以及通过所述方法获得的生物美容产品。特别地，本发明涉及通过从自体皮肤中获取表皮细胞和培养得到成纤维细胞，将其中一种或两种细胞添加到自体外周血富含血小板的血浆中，同时还可以添加营养因子，生产出含自体活细胞的生物美容产品，本发明的生物美容产品可用于白癜风祛斑、瘢痕修复、皮肤祛皱以及除斑等美容作用。

背景技术

日前，市场上已经出现了各种细胞用于美容方面的产品，也被商家赋予了各种神奇的功效和希望，尤其是干细胞在美容方面的应用。事实上，活细胞在医学美容的应用上取得一些很好的效果，主要体现在皱纹填充、祛斑等方面起到一定作用。但是现在市场上应用的活细胞多数都为同源异体的，进入皮肤内容易发生免疫排斥而被清除，因而在皮肤中发挥作用的细胞微乎其微。

细胞生长因子也是一直受追捧的美容方法，出现很多细胞生长因子被应用到美容中，包括干细胞因子、表皮细胞生长因子、干细胞生长因子、神经生长因子及纤维母细胞生长因子等。各种细胞因子需要在低温条件下保存，以保持其蛋白活性。然而在化妆品制作过程中，由于无法保证整个生产过程均处在低温条件下，那么添加该产品极易造成细胞因子的失活和变性，从而失去细胞因子对组织和细胞的修复活性。同时，细胞因子加入到化妆品中，其有效浓度必然被降低，不能保证细胞因子对细胞核组织的修复效果。消费者在使用过程中很难对该产品进行定量使用，可能会造成效果不稳定的现象。

另外，羊胎素和肉毒杆菌内毒素作为目前备受消费者青睐的产品，因其使用简便、效果显著、安全可靠而广受欢迎。但它们使用后的副反应较多，常见的有表情不自然、畏光流泪、局部肿胀、淤斑、注射部位麻木、头痛、额部紧绷感、邻近部位皱纹加深等。这两种因子应用易产生较明显的依赖性，随着注射的次数增多，人对其的敏感性降低，而导致病人使用该方法更为频繁，每次的使用量也会逐渐增多。

综上，因为各种原因和问题，目前市场上生物美容产品存在各种效果不佳，对人们的皮肤美容的疗效还远远不够，即使其中加入各种营养成分。本发明利用个体化的材料和营养物质，发挥其细胞生物学活性和自分泌营养因子的功能，将对消费者的美容效果达到更佳的美容作用，并且联合美容物理疗法将产生更好的白癜风祛斑、瘢痕修复、皮肤祛皱以及除斑等效果。

发明内容

本发明是我们研发团队通过多年的科研工作，发现了能从自体皮肤中获得表皮细胞和成纤维细胞，通过体外体内实验证实这两种细胞对皮肤产生更好地白癜风祛斑、疤痕修复、皮肤祛皱以及除斑等作用。本发明利用自体皮肤来源的表皮细胞和成纤维细胞的生物学作用，可以高效产生皮肤美容作用，而且联合美容物理疗法将产生更好功效。本发明中的表皮细胞是成对存在，中间的孔隙中气孔，可以进行气体交换，细胞内有叶绿体，对皮肤起重要保护作用。表皮细胞能分泌人表皮生长因子(Epidermalgrowthfactor，EGF)，改善皮肤微循环，提供良好的营养环境；表皮生长因子不仅具有促进皮肤和黏膜创伤的愈合，防治溃疡以及消炎镇痛的作用，而且能有效促进和调节表皮细胞的生长和增殖，表皮细胞生长因子对保护和疗养皮肤、黏膜具有独特的功效。

本发明中成纤维细胞是皮肤真皮中的主体细胞成分，其分泌的胶原纤维，弹性纤维及基质成分，与成纤维细胞一同构成了真皮的主体。成纤维细胞可分泌人碱性成纤维细胞生长因子(basicFibroblastgrowthfactor，bFGF)，能全面启动皮肤各层的更新功能，促进成纤维细胞生长，收缩毛孔，效果显著，并能及时补充水分，回复肌肤的弹性和光泽。

尽管很多化妆品公司和美容医生声称非介入的美容方法能达到使皮肤皱纹消失的效果，但科学研究表示这一方法的效果是有限的。皮肤衰老反映在细胞水平即为细胞衰老。当紫外线和其他外界环境能刺激成纤维母细胞，上调胶原酶的基因表达，从而使胶原酶生成增多，这导致了胶原蛋白被降解，水分流失，皮肤组织失去支撑，皱纹和黄斑即生成。

本发明提供了自体表皮细胞和成纤维细胞同时制备的方法，其中，所述方法包括通过从自体皮肤中获取表皮细胞和培养得到成纤维细胞。

本发明所述的自体表皮细胞由自体皮肤经酶消化法和机械法直接获得表皮单细胞悬液，减去了中间复杂的过程，并保证了表皮细胞的活性和数量。获得的表皮细胞经westernblotting蛋白质表达检测，其特异高表达表皮生长因子。