[发明专利]人EGFR基因突变检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种人EGFR基因突变的检测方法(优选是非诊断方法)，其包括：

(1)在8个PCR反应管中分别混合核酸提取液、DNA聚合酶、dNTP、引物和探针，其中，每个反应管中包含的引物和探针的核苷酸序列分别如下表所示：

管编号引物探针1SEQ ID NOs:1-39SEQ ID NO:702SEQ ID NOs:40-42SEQ ID NO:713SEQ ID NOs:43-45SEQ ID NO:724SEQ ID NOs:46-52SEQ ID NO:735SEQ ID NOs:53-59SEQ ID NO:746SEQ ID NOs:60-62SEQ ID NO:757SEQ ID NOs:63-65SEQ ID NO:768SEQ ID NOs:66-67SEQ ID NO:77

，其中所述探针标记有荧光基团和淬灭基团，并且核苷酸序列如SEQIDNOs:2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、41、44、47、49、51、54、56、58、61和64所示的引物标记有淬灭基团；

(2)进行实时PCR，根据荧光检测结果计算出的Ct值判断是否有靶核酸存在于样品中。

2.权利要求1所述的方法，其中核酸提取液是从样品中提取的，优选其中提取是采用磁珠提取法提取的，更优选提取的过程是：向样品加入核酸萃取液(优选核酸萃取液包含异硫氰酸胍、乙二胺四乙酸钠、吐温-20、高氯酸钠、乙醇和pH缓冲液(如，Tris-HCl))，保温后加入磁珠，混合均匀后，施加磁场后，弃去其中液体，然后洗涤(优选洗涤两次，更优选其中第一次洗涤所用的洗涤液包含高氯酸钠和乙醇，也更优选其中第二次洗涤所用的洗涤液包含乙醇)，并洗脱(优选洗脱所用的洗脱液包含pH缓冲液(如，Tris-HCl))。

3.权利要求1所述的方法，其中每个反应管还进一步包含内对照核酸、内对照引物和内对照探针。