[发明专利]人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法

权利要求书

1.一种人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于，步骤如下：

步骤1：细胞培养阶段，具体如下：

(1)脐带MSCs分离培养：取新生儿脐带一条，放入培养平皿中，将脐带沿结扎内侧剪断，取中间部分，加入生理盐水清洗脐带表面，至表面干净无血后，转移至另一个培养皿中，剪成小段，把脐带表皮、脐动脉及脐静脉剥离，获得华尔通氏胶，用含有双抗的PBS清洗三遍，用手术刀剪切成组织块，然后接种于培养瓶中培养，培养基为FBS的α-MEM，倒置显微镜观察细胞形态，72h后更换培养基，去除未贴壁细胞，以后视细胞生长状况进行换液；

(2)脐带MSCs传代培养：倒置显微镜观察细胞形态，待细胞融合达到80％后，进行传代，传至3代后，部分细胞可冷冻保存，或者一部分细胞用于实验；

步骤2：MSCs诱导分化阶段，具体如下：

消化收集第三代细胞，用PBS清洗2次，按设定的细胞密度接种于6孔板，培养24h，待细胞贴壁后，对照组不加入任何试剂，实验组培养液中加入5-Aza，与细胞共孵育24h后更换培养基，用PBS洗涤2次，改用完全培养基继续培养，每3d换液1次。

2.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤1的(1)中的剪成小段的大小范围2-3cm。

3.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤1的(1)中的双抗的质量浓度为1％。

4.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤1的(1)中的组织块的大小范围为1-2mm³。

5.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤1的(1)中的FBS的质量浓度为10％。

6.根据权利要求1所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤1的(2)中的传代是按1:3比例进行的。

7.根据权利要求6所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤1的(1)中的培养瓶为75cm²培养瓶。

8.根据权利要求6所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤1的(1)中的以后视细胞生长状况进行换液的方式为平均3d换液一次。

9.根据权利要求6所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤2中的设定的细胞密度为2×10⁴/cm²。

10.根据权利要求6所述的人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的方法，其特征在于所述的步骤2中的5-Aza的终浓度为10μmol/L。