[发明专利]一种用胶体金层析技术检测核酸的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种检测核酸的胶体金标检测试剂盒，包括：

（1）、通用胶体金试纸条：所用试纸条被固定于PVC底板上，从左往右依次是样品垫、玻璃纤维、NC膜、吸水纸；NC膜上有T线（检测线）和C线（质控线），所述检测线上包被能特异性结合标记物b的物质，所述质控线上包被能特异性结合标记物a的分子，所述标记物b不同于标记物a；通用探针1上标记有胶体金颗粒或同时在另一端标记有标记物a，且固定于试纸条的玻璃纤维素膜上；

（2）、分别盛有特异探针A系列、特异探针B系列的探针管：特异探针A系列的一端和待测核酸杂交，并标记有标记物a，另一端和通用探针1杂交，或当通用探针1既标记有胶体金颗粒又标记有标记物a时，特异探针A系列不带任何标记，特异探针A系列可以有多种，如A1、A2……，分别和待测核酸的不同区域互补配对杂交，装在不同的探针管里；特异探针B系列一端和待测核酸杂交，另一端标记有标记物b，或者当试剂盒中还包括带有标记物b的通用探针2时，其同时和通用探针2互补配对杂交，此时特异探针B系列不带任何标记，特异探针B系列可以有多种，如B1、B2……，分别和待测核酸的不同区域互补配对杂交，分别装在不同的探针管里。

2.根据权利要求1所述的检测核酸的胶体金标检测试剂盒，其特征在于：所述标记物a、b可以为抗原或半抗原，如生物素、地高辛或荧光染料，其中荧光染料可以为Cy3、Cy5、Fam、Fit等，则在试纸条上的T线或C线上与它们特异性结合的分子为链霉亲和素、抗地高辛抗体、相应抗荧光染料抗体。

3.根据权利要求3所述的检测核酸的胶体金标检测试剂盒，其特征在于：所述的特异探针A系列标记地高辛，通用探针2标记生物素，则在试纸条T线处包被链霉亲和素，C线处包被抗地高辛抗体。

4.权利要求1-3任一项所述的检测核酸的胶体金标检测试剂盒在病原体核酸检测中的应用，其特征在于：所述的病原体是寄生虫、真菌、细菌、病毒、支原体以及衣原体。

5.根据权利要求1-3任一项所述的检测核酸的胶体金标检测试剂盒，其特征在于：所述通用探针1序列为：5’-SH-CATCTTCCAGCGGCCTTATGCAGTTGCTCTCCATTTTTAGAAGGCGTCCGTCTTTGAGGC-3’（SeqNo.1），其中SH为巯基，5’端为巯基修饰，也可进行其他化学基团修饰，如-NH₂。

6.一种核酸金标快速检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）、设计探针：通用探针1、特异探针A系列、特异探针B系列，其中，通用探针1的5’端巯基化修饰，也可进行其他化学基团修饰，如-NH₂，然后标记胶体金颗粒，或同时在另一端标记有标记物a；特异探针A系列，其一端和待测核酸杂交，另一端和通用探针1杂交，标记有标记物a，或当通用探针1既标记有胶体金颗粒又标记有标记物a时，特异探针A系列不带任何标记，特异探针A系列可以有多种，如A1、A2……，分别和待测核酸的不同区域互补配对杂交；特异探针B系列一端和待测核酸杂交，另一端标记有标记物b，或者当试剂盒还包括带有标记物b的通用探针2时，其同时和通用探针2互补配对杂交，此时特异探针B系列不带任何标记，特异探针B系列可以有多种，如B1、B2……，分别和待测核酸的不同区域互补配对杂交；

（2）、制备通用试纸条：所述试纸条被固定于PVC底板上，从左往右依次是样品垫、玻璃纤维、NC膜、吸水纸；NC膜上有T线（检测线）和C线（质控线）；所述检测线上包被抗标记物b的抗体，能特异性捕获结合标记物b的通用探针2或结合标记物b的特异探针B系列；所述质控线上包被抗标记物a，能特异性捕获结合标记物a的特异探针A或既标记有胶体金颗粒又标记有标记物a的通用探针1；将通用探针1标记上胶体金颗粒或同时标记上标记物a后固定于玻璃纤维素膜上，将特异探针A、特异探针B或同时加入通用探针2和待测核酸杂交后滴在样品垫上层析，检测线显色表示有待测核酸存在，质控线显色表示检测有效。

7.根据权利要求6所述的核酸金标快速检测方法，其特征在于：所述的标记物b和标记物a可以为地高辛、生物素及其他的抗原或半抗原，如荧光染料（Cy3、Cy5、Fam、Fit），则在试纸条T线或C线上与它们特异性结合的分子为相应的抗地高辛抗体、链霉亲和素或抗荧光染料抗体。

8.根据权利要求6-7所述的核酸金标快速检测方法，其特征在于：所述的特异探针A系列标记地高辛，通用探针2标记生物素，则在试纸条T线处包被链霉亲和素，C线处包被抗地高辛抗体。