[发明专利]SEM单克隆抗体的制备方法及应用

权利要求书

1.SEM单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：以重组SEM免疫BALB/c小鼠，再用小鼠的脾细胞直接与骨髓瘤细胞融合，采用间接酶联免疫吸附法筛选产SEM单克隆抗体的优势杂交瘤细胞株，得到SEM单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的SEM单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述重组SEM的制备与纯化过程为：以金黄色葡萄球菌的DNA为模板进行PCR扩增，获得sem基因完整片段，测序后采用NdeI和XhoI分别酶切PCR产物和pET-28a(+)，连接，筛选获得重组质粒pET-28a-SEM，重组质粒pET-28a-SEM在表达场所内进行表达，表达菌株进行培养、离心收集细胞菌体，再将细菌菌体超声破碎，离心弃沉淀，上清进行过镍琼脂糖亲和层析、阳离子交换层析纯化收集，进一步浓缩，获得纯化的SEM重组蛋白。

3.根据权利要求2所述的SEM单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述重组的pET-28a-SEM质粒的表达场所为大肠杆菌。

4.根据权利要求1所述的SEM单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述优势杂交瘤细胞株采用辛酸-饱和硫酸纯化腹水，透析后得到SEM单克隆抗体。

5.根据权利要求1至4任一所述的SEM单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述重组SEM与等量完全或不完全弗氏佐剂混合搅拌法将其乳化，乳化完全后用于免疫BALB/c小鼠。

6.如权利要求5所述的SEM单克隆抗体的应用，其特征在于，所述SEM单克隆抗体用于制备检测样品中含有SEM的试剂条或试剂盒。

7.如权利要求5所述的SEM单克隆抗体应用于构建SEM的双抗夹心检测方法，其特征在于，包括以下步骤：用1.8～2.7μg/mL的上述制备的SEM单克隆抗体，包被酶标板并在4℃过夜，洗板，用于洗去未与酶标板结合的包被抗体；加入封闭液对酶标板上多余结合位点进行封闭，洗板，用于洗去酶标板上多余封闭液；在酶标板上加入样品，孵育后洗板；以SEM兔抗血清为一抗加入酶标板，反应后洗板，再以辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗，反应后洗板；加入显色液使酶标板显色，然后加入硫酸终止反应，用酶标仪检测OD₄₅₀；将检测得到的OD₄₅₀值带入标准曲线即可求得样品中SEM的含量。