[发明专利]一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是涉及一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法。

背景技术

甘草为豆科甘草属植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch、胀果甘草GlycyrrhizainflataBat或光果甘草GlycyrrhizaglabraL的干燥根及根茎。是我国传统中药材，素有国老之称，味甘、性平。归心、肺、脾、胃。补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒。可缓解药物毒性、烈性。甘草广泛应用于医药、烟草、食品等领域。其富含三萜和黄酮类成分,其中五环三萜类化合物甘草酸是主要有效成分之一。甘草酸经胃酸水解或经肝中β-葡萄糖醛酸酶分解形成甘草次酸在体内发挥药理作用。甘草次酸(GlycyrrhetinicAcid)的分子式为C₃₀H₄₆O₄，分子量470.64KD，为白色结晶性粉末，熔点为288-297℃。近年随着现代中药的发展，各国学者在中医理论的基础上，对甘草有效成分-甘草次酸的药理作用进行了深入研究。研究发现甘草次酸不仅具有抗炎、抗溃疡、抗病毒、降血脂、镇咳、平喘及祛痰等作用，还可用于防治病毒性肝炎、高血脂症和癌症等疾病，是有效的干扰素诱生剂及细胞免疫调节剂。医药生产企业常采用水提、含水醇提、碱提等方法从甘草药材中提取甘草酸,提取后所剩余的甘草药渣通常作为工业废料弃去。进一步的研究表明甘草药渣中富含大量的甘草次酸化合物。因而,甘草药渣是一种宝贵的可再利用资源。专利CN103142682B公开了“一种从甘草渣中提取甘草黄酮的方法”专利CN102363796B公开了“一种微生物发酵转化生产甘草次酸的方法”但是从甘草药渣中提取甘草次酸的报道还尚未多见。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法。该方法显著提高了甘草次酸的含量。

一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法，包括如下步骤:

1、菌种的活化：将黄曲霉AspergillusflavusHC-12接种于改良PDA培养基，然后按0.5％接种量接种于液体培养基中进行培养，培养时间2～4d,温度为20～30℃；

2、发酵培养：将处于生长期的经液体培养基培养的菌种按10％接种量接种于含新鲜甘草渣发酵液的密闭发酵瓶中进行发酵培养，即得甘草次酸发酵液；

3、分离：将甘草渣发酵液中甘草次酸进行分离，即得甘草次酸粗品。

优选的是，所述的一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法，步骤1中改良PDA培养基组成为：土豆汁100g、葡萄糖100g、琼脂50g、蛋白胨100g、蒸馏水1000ml、pH7.0

优选的是，所述的一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法，步骤2中的液体培养基各原料质量份数为：玉米汁0.5～1.5份，葡萄糖2.5～5.0份，甜高粱秸秆粉1.5～5.0份、酒石酸铵0.2～1.5份，、硫酸铵0.1～1.0份，硫酸镁0.05～0.1份，磷酸二氢钾0.08～0.15份，其余为蒸馏水。

优选的是，所述的一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法，步骤2中的液体培养基培养条件为：菌株置于无菌三角瓶中于转速100rpm的摇床中振摇培养，培养18-24h.

优选的是，所述的一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法,步骤2中的新鲜甘草渣发酵液各原料质量份数组成为：甘草渣10～30份、酒石酸铵0.2～0.5份，磷酸氢二钾0.2～0.5份，硫酸镁0.05～0.1份，氯化钙0.01～0.05份，吐温800.01～0.05份、磷酸铵0.1～0.5份，其余为蒸馏水，初始pH4～5。

优选的是，所述的一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法,步骤2中新鲜甘草渣发酵液中甘草渣制备方法为：甘草经加工提取甘草酸后的残渣，风干粉碎至粒径为0.25m，含水率为10％。

优选的是，所述的一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法，步骤2中发酵条件为：新鲜甘草渣发酵液40～100ml、发酵温度30～40℃，搅拌速度为150～180rpm，发酵4～6d。

优选的是，所述的一种利用甘草药渣生产甘草次酸的方法，分离过程包括以下步骤：

a、将甘草次酸发酵液于转速2000-2500r/min条件下离心10min,过滤，上清液备用；

b、将发酵滤渣按固液比为1:10进行蒸馏水连续回流提取1-4次，离心、过滤，取上清液；