[发明专利]一种鲤鱼重组抑菌蛋白及其制备方法

说明书

本发明公开了一种鲤鱼重组抑菌蛋白及其制备方法，所述鲤鱼重组抑菌蛋白具有序列表SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，并由序列表SEQ ID NO:2所示的碱基序列编码。本发明所得抑菌蛋白能够有效抑制细菌、真菌等微生物的生长、繁殖和存活，拓宽了鱼类资源的加工利用。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种鲤鱼重组抑菌蛋白及其制备方法。

背景技术

我国水域辽阔，水产资源十分丰富，尤其是鱼类资源非常丰富，其中蕴含了非常丰富的遗传资源，具有极高的生物学价值。但长期以来我国的渔业养殖和鱼类加工均处在较低层次的发展阶段，产生和丢弃了诸如鱼卵、肝胰、脾脏、垂体、血清以及皮等大量水产品加工废弃副产物，因此鱼类资源的加工利用率低，经济效益较差。

申请人多年来对鱼类生物资源的多方面应用进行了深入研究，发现鲤鱼中的部分蛋白产物具有显著的抑菌作用，能够抑制多种微生物菌的生长、繁殖和存活，如果将其实现批量制备，将有效提升渔业副产物的经济学价值，并为鱼类副产物的科学合理利用提供必要的研究基础，在环境、资源、科学和经济等多方面具有重要意义。

发明内容

申请人在多年的科研中，发现了鲤鱼体内的抑菌蛋白，并经过深入研究实现了抑菌蛋白的重组和制备，提高了鱼类资源的加工利用率，避免副产物随意抛弃而对自然环境所产生的压力，提升了鱼类加工的综合效益。

具体地说，本发明是通过如下技术方案实现的：

首先，本发明公开了一种鲤鱼重组抑菌蛋白，具有序列表SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，并由序列表SEQ ID NO:2所示的碱基序列编码。

其次，本发明公开了上述抑菌蛋白的重组制备方法，具体包括如下步骤：

1)以上游引物F1：5’-TAGGATCCACTGGGATTCCTGGAGGCCTTG-3’，下游引物R1：5’-GCCCTCGAGCATGCAGGTGTTTTCAG-3’，通过PCR扩增序列表SEQ ID NO:2所示的碱基序列；

2)PCR扩增基因片段，连接到pMD19-T载体上，转入JM109感受态细胞，提取阳性质粒；

3)用BamH I、Xho I双酶切阳性质粒和PET-30制备载体，连接所得制备载体转入BL21大肠杆菌并在诱导剂IPTG作用下制备得到可溶形式的重组蛋白。

在上述方法中，编码抑菌蛋白的碱基序列既可以从鲤鱼组织中提取总RNA经RT-PCR处理获得，也可以通过人工合成的方式获得具有序列表SEQ ID NO:2所示的碱基序列的基因片段。

在上述方法中，本领域技术人员容易理解在获得重组蛋白后为了提高抑菌效果对其进行纯化，纯化工艺采用生物学上的常用方法，例如目的蛋白经离心收集、用Buffer A(含0.4-0.5mol/L NaCl、0.5-1mol/L尿素、5％甘油、50mmol/LTris－HCl，pH7-9)透析、浓缩、亲和层析进行纯化。

最后，本发明还公开了上述蛋白在抑制微生物菌中的应用。此处所称的微生物菌泛指常见的细菌、真菌等微生物，申请人经过研究证实，本发明的抑菌蛋白对荧光假单胞菌、铜绿假单胞菌、大肠杆菌尤其具有理想的抑制效果，因此本发明的应用优选适用于上述三种菌。

本发明的技术方案，成功获得了能够高效抑制微生物菌株的抑菌蛋白，提高了渔业和鱼类加工的经济价值和综合利用率。

具体实施方式

为了充分说明本发明的技术方案，申请人提供了若干具体实现。如下所提供的实施例仅为示意性的，并不对本发明的具体实施方法构成特别限定。

实施例1