[发明专利]抗驼乳重链IgG3单克隆抗体、含有所述单克隆抗体的试纸及其应用

说明书

本发明提供一株小鼠骨髓瘤细胞H2H6以及由该细胞产生的抗驼乳IgG3单克隆抗体IgG，其价效达1:102400。本发明还提供含有驼乳重链IgG3抗体的检测试纸，所述试纸包括样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，其中，抗驼乳IgG3的单克隆抗体由胶体金标记，所述检测试纸采用竞争法制备得到。本发明利用驼乳特异性重链抗体作为免疫原制备单克隆抗体，并制作检测试剂盒/检测试纸；通过对比竞争法与夹心法，本发明的检测试纸检测效果好，具有特异性与灵敏度高、检测时间短的优点；可用于驼乳及其制品中乳源掺假的快速检测。

【技术领域】

本发明涉及以抗体为特征的生物检测试剂，特别是一种抗驼乳重链IgG₃单克隆抗体，还涉及含有该单克隆抗体的试剂盒及其应用。

【背景技术】

骆驼是我国边疆的主要畜种之一，其身处严酷环境经长期自然选择形成了其它畜种不具备的独特生物学特性。1993年，Hamers Casterman等人发现在骆驼血清中存在两种结构的天然IgG抗体，一种为具有两条重链和两条轻链的常规四聚体IgG₁(约170kD)，另一种为仅有两条重链构成的二聚体抗体，称为重链抗体(heavy-chain antibodies,HCAbs)，包括IgG₂(约100kD)和IgG₃(约90kD)亚型。与一般抗体相比，这些重链并不与轻链缔合，它们的重链可变区(VHH)与铰链区间并没有传统免疫球蛋白中的第一稳定区(CH1),可变区直接与铰链区和Fc相连接，重链抗体的VHH还具有不同于VH的特征(见图1)。但是这种二聚体免疫球蛋白仍能像正常抗体一样与抗原等靶标紧紧结合，而且不像单链抗体那样相互粘连聚集成块，因而在骆驼的体液免疫中发挥非常重要的作用。

骆驼是唯一含有重链抗体的哺乳动物，这些重链抗体尽管缺失轻链，但作为抗体其功能是完整的，这表明重链抗体的重链可变区(VHH)单独能够形成完整的抗原结合位点。重链抗体VHH具有分量小、结构稳定、亲和力高、人体免疫原型弱、易表达、易纯化的优点。

驼乳对于大多数人来说较为陌生，但是对于许多国家来说，驼乳是无可替代的营养珍品。驼乳不仅富含人体必需的多种氨基酸，还含有溶菌酶、免疫球蛋白、乳铁蛋白等保护性蛋白和多种生物活性因子，可杀菌抑菌、调节免疫力，在机体抗病机制方面起着重要作用。其中免疫球蛋白是骆驼常乳和初乳中最值得关注的免疫因子，骆驼常乳和 初乳中最主要的免疫球蛋白为IgG，而IgM、IgA含量很少。驼乳IgG包括三个亚类，分别为IgG₁、IgG₂和IgG₃。在许多国家不仅饮用驼乳摄取营养，还常用驼乳来辅助治疗腹泻、胃溃疡、糖尿病等疾病，并取得了良好的成绩。因此，近年来驼乳及其制品的开发和研究逐渐兴起。

我国是最早驯养双峰驼的国家之一，也是双峰驼主要分布区域之一。但我国驼乳产业起步较晚，然而随着人们对驼乳的认识加深，驼乳的需求量日渐增加，需求量远大于供应量。由于驼乳不像牛乳那样容易挤出，而且产量较低，因此一方面限制了驼乳企业的发展，另一方面造成了驼乳掺假现象的发生。然而，现有技术中还缺少能够快速、有效地检测驼乳是否掺假的技术。

金标免疫层析技术是以胶体金作为示踪标记物或显色剂应用于抗原抗体特异性免疫反应的一种免疫分析技术，具备操作简单、特异敏感、可单份测定、成本低、不需要仪器的特点。金标免疫层析试纸条通常包括样品垫、金标结合垫、硝酸纤维素膜、吸收垫和底板。其中，样品垫置于试纸条的前端，用于进样；金标结合垫是胶体金标记过的待测物的受体的承载体，测试液经样品垫流经时，胶体金结合物从金标结合垫上释放并与测试液中的待测物特异性结合形成免疫复合物，随测试液一起流向硝酸纤维素膜；硝酸纤维素膜是金标免疫层析试纸条的结果显示区域，其一般有两条线：捕获线(或称测试线)和控制线。捕获线上包被待测物的另一特异性抗体，而控制线上包抗胶体金标记物中抗体的羊抗鼠IgG，即抗金标结合垫上胶体金标记过的受体的抗体；吸收垫通常置于试纸条末端。

目前，胶体金免疫层系技术已经广泛应用于食品、药品、生物医学等许多领域的检测。