[发明专利]一种可高压灭菌的菌落显色培养基、制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及菌落书面鉴定领域，尤其涉及一种可高压灭菌的菌落显色培养基、制备方法及用途。

背景技术

菌落总数就是指在一定条件下(如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等)每克(每毫升)检样所生长出来的细菌菌落总数。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

目前国内对食品中菌落总数的的标准检验方法(GB4789.2-2010)中所使用的培养基是平板计数琼脂(复配食品添加剂中菌落总数检测方法并没有详细规定，一般按照标准《GB4789.2》中的方法检测)。经过笔者多年的微生物检测工作，用普通的平板计数琼脂来检测复配食品添加剂中的菌落总数往往会出现下面的结果，第一因某些细菌菌落太小或菌落形态与样品颗粒十分相似，导致菌落与样品颗粒不易区分，特别是颗粒多时会使计数结果出现较大误差，影响了菌落计数结果的准确性；第二在复配食品添加剂均质后倒入平板培养后，因试样本身的颗粒与菌落形态很像，使得计数出现误差，而影响实验结果。

有研究表明，2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)是一种氧化剂，细菌在其新陈代谢过程中会产生琥珀酸脱氢酶，在琥珀酸脱氢酶的作用下，TTC接受氢(H)成为红色而稳定的三苯甲臢(TPF)从而使菌落呈现红色或浅红色，故在平板计数琼脂中添加TTC,可使菌落与食品均质样中的固体小颗粒区分开，从而提高检测数据的准确性。但是TTC不能直接加入到培养基中与培养基一同灭菌，否则灭菌后会使培养基变成褐色而导致TTC显色反应失效，进而不能用于实验。

中国专利申请CN103725744A公开了一种显色培养基，除了琼脂等必要营养物质外还加入了TTC及吐温80，但吐温80是一种油状物质，不能同其他琼脂等粉末状物质共同存在，所以不能制备为最终可售的平板计数琼脂。

故开发一种能够最终可市售的菌落显色培养基就成为必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种边界清晰，菌落显色明显，易于计数的可售平板计数琼脂培养基。

为实现上述目的，本发明提供一种可高压灭菌的菌落显色培养基，其特征在于，该培养基每升中包含琼脂23.5g，蔗糖脂肪酸酯SE-110.005-0.015g，2,3,5-氯化三苯基四氮唑0.005-0.015g。所述琼脂是市售平板计数琼脂。

进一步，将各组分按照配比溶于蒸馏水中，煮沸溶解，用1mol/LHCL或1mol/LNaOH调节其pH值为7.0±0.2，115℃高压灭菌15min后制备得到。pH值为7.0±0.2，适于微生物培养，同时满足国标GB4789.2-2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》中的要求。

本发明还保护所述菌落显色培养基用于测定食品、食品添加剂中菌落数的用途。

所述的食品添加剂包括所有的食品添加剂，比如复配食品添加剂。

蔗糖脂肪酸酯是非离子表面活性剂，可作用于细菌细胞膜某些受体，使休眠状态的细菌迅速感知外界适宜的生长环境，快速生长，同时降低细菌表面和培养基的表面张力，使营养物质更易吸收。蔗糖脂肪酸酯SE-11是粉末状，与2,3,5-氯化三苯基四氮唑TTC、琼脂等其他营养物质物理状态一致，可以按比例充分混合后制成菌落总数显色计数琼脂出售，而且可与2,3,5-氯化三苯基四氮唑TTC、琼脂等物质共同灭菌而不破坏2,3,5-氯化三苯基四氮唑TTC的显色反应，其加入量少，成本低，并且研究表明蔗糖脂肪酸酯为一种环境友好型的非离子表面活性剂。本发明的发明人进行了大量的前期试验，最后将加入的蔗糖脂肪酸酯(SE-11)加入量的范围缩小到0.005g-0.020g，将2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)加入量的范围缩小到0.005g-0.020g，并以0.005g为单位递增做试验，确定最后蔗糖脂肪酸酯(SE-11)以及2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)加入量，及菌落显色培养基的组分确定。

本发明的有益效果：2,3,5-氯化三苯基四氮唑TTC、蔗糖脂肪酸酯SE-11可与该培养基的其它组分一起经高温高压灭菌后备用而不影响TTC的显色效果；该培养基成本低，易推广，操作简便；菌落显色明显，易于计数。