[发明专利]一种日本囊对虾微卫星三重PCR检测方法在审
申请号: | 201510664366.3 | 申请日: | 2015-10-15 |
公开(公告)号: | CN105177158A | 公开(公告)日: | 2015-12-23 |
发明(设计)人: | 董世瑞;栾生;王素英;王博玮;陈瑾 | 申请(专利权)人: | 天津商业大学 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68 |
代理公司: | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人: | 仝林叶 |
地址: | 300134*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 日本 对虾 卫星 三重 pcr 检测 方法 | ||
1.一种日本囊对虾微卫星三重PCR检测方法,其特征是,包括下述步骤:(1)设计、合成3重PCR引物;(2)提取总DNA;(3)三重PCR反应;(4)电泳检测PCR产物;所述3重PCR反应包括三重PCR反应体系和三重PCR反应程序,
所述步骤(3)三重PCR反应体系的引物为SEQ036、SEQ031和SEQ043的组合,所述三重PCR引物的序列如下:
SEQ036正向引物序列:5’-AAGGGAATTTGAGTAGAGTCTG-3';SEQ036反向引物序列:5'-GTTACATGCGAGTTGCTATT-3'
SEQ031正向引物序列:5'-ACGCTGGTTTCATTGGGATT-3';SEQ031反向引物序列:5'-AAATGTGGGAGGGCGAAA-3'
SEQ043正向引物序列:5'-ATTGCTGTCGGGATGAGA-3';SEQ043反向引物序列:5'-TGGTTGTTCGGAAGAGGT-3'
所述的三重PCR反应体系为:10×Buffer2μL;25mMMg2+2μL;10mMdNTP2μL,10μM3对扩增引物SEQ036、SEQ031和SEQ043各1μL;5U/μLTaqDNA聚合酶0.1μL;100ng/μL日本囊对虾总DNA:1μL;灭菌双蒸水补足至25μL;
所述的三重PCR反应程序为:94℃预变性5min;94℃变性40s,51℃退火1min,72℃延伸1min,共进行28个循环;最后72℃延伸5min;4℃保存结束反应。
2.根据权利要求1所述的日本囊对虾微卫星三重PCR检测方法,其特征是,所述步骤(4)采用8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PCR产物。
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