[发明专利]猪霍乱沙门氏菌酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术和免疫学领域，具体涉及一种检测猪霍乱沙门氏菌的酶联免疫试剂盒。

背景技术

沙门氏菌有2000多个血清型，在中国已发现200 多个菌型。沙门氏菌为革兰氏阴性杆菌,能运动,不形成芽孢，兼性厌氧，具周身鞭毛。最适生长温度为37 ℃，最适p H 为6.8—7.4沙门氏菌生命力顽强,对外界的抵抗力较强，对干燥腐败等因素有一定的抵抗力，在7-45 ℃都能繁殖,冷冻或冻干后仍存活，在冻土中可过冬,在猪粪中可存活1-8个月，在粪便氧化池中可存活47 d，在垫草上可存活2-5 个月，在10 %-19 %食盐腌肉中能存活75d 以上。在适合的有机物中可生存数周、数月甚至数年，但对消毒剂的抵抗力不强，3 %来苏儿、福尔马林等能将其杀死。沙门氏菌不同程度地存在于健康猪的肠道和胆囊内，一般不出现症状,一旦饲养管理差、圈内潮湿导致猪的抵抗力降低时，则引起发病。当败血性猪霍乱沙门氏菌侵入猪体后，立即侵入肠壁淋巴间隙,由此再侵入血液，在血液中大量繁殖，从而引起败血症。病菌繁殖时产生大量内毒素，内毒素作用于白细胞进而引起炎症、高烧和腹泻。猪霍乱沙门氏菌感染在主要是经粪口途径传播，如果患者家中有养猪场，卫生习惯不良，且有慢性肝病基础，免疫力低下，故考虑可能是摄入了被沙门氏菌污染的食物或水而造成感染。猪霍乱沙门氏菌对人畜都有极大危害，因此急需一个快速准确的方法进行检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测猪霍乱沙门氏菌的试剂盒。

进而，本发明提供了一种用于检测猪霍乱沙门氏菌的酶联免疫试剂盒，所述的试剂盒含有：

(a)固相载体，所述的固相载体上包被有作为捕捉抗体的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体5D6D9G3B4，所述的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体5D6D9G3B4由小鼠杂交瘤细胞系5D6D9G3B4， CGMCC No. 8764产生；

(b) 容器a，所述的容器a中装有作为检测抗体的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体5D2G2D9C1，所述的抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体5D2G2D9C1由小鼠杂交瘤细胞系5D2G2D9Cl，CGMCC No.8763产生。

在一优选例中，所述的固相载体为酶标反应板。

在另一优选例中，所述的检测抗体带有可检测的标记物。

在另一优选例中，所述的可检测的标记物为辣根过氧化物酶。

在另一优选例中，所述的试剂盒还含有阳性对照和阴性对照。

在另一优选例中，所述的阳性对照为灭活的猪霍乱沙门氏菌菌液，所述的阴性对照为灭菌的脑心浸出液肉汤。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1本发明的单克隆抗体的SDS-PAGE电泳图

Lane1:5D2G2D9C1，Lane2:5D6D9G3B4。

具体实施方式

本发明人的研究表明，以猪霍乱沙门氏菌作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，分离纯化得到两株抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体，即5D6D9G3B4，保藏号CGMCC No.8764和5D2G2D9C1，保藏号CGMCC No.8763，上述两株单克隆抗体的抗体效价可达到1:100000，其能够特异性、高效地与猪霍乱沙门氏菌结合。以上述单克隆抗体5D6D9G3B4包被酶标反应板作为捕捉抗体，用辣根过氧化物酶标记的上述单克隆抗体5D2G2D9C1作为检测抗体，制作酶联免疫检测试剂盒。结果显示，上述猪霍乱沙门氏菌检测试剂盒检测灵敏度达到10⁵cfu/ml，具有重复性、准确性好的优点，孔间误差小于5%，板内CV小于3%。其与单增李斯特、猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、出血性大肠杆菌0157:H7、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽抱杆菌等共计74种病原细菌均无交叉反应。

在此基础上，本发明人进而根据双抗体夹心酶联免疫法，经过反复测试，终于获得了一种可快速、高效检测食源性猪霍乱沙门氏菌的酶联免疫试剂盒。

抗体

本发明包括两株抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体。本发明的两株抗猪霍乱沙门氏菌单克隆抗体可以利用小鼠杂交瘤细胞系5D6D9G3B4 （CGMCC No.8764）和小鼠杂交瘤细胞系5D2G2D9C1 （CGMCC No.8763）分别分泌产生。