[发明专利]粒状可溶的葡聚糖制备

说明书

本申请是申请日2008年5月8日、申请号200880014957.4、发明名称“粒状可溶的葡聚糖制备”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种粒状可溶的β-葡聚糖。更具体而言，本发明涉及一种改良方法和粒状可溶的β-葡聚糖的组合物。

背景技术

本申请要求2007年5月8日申请的，发明名称为“可溶葡聚糖制备”的U.S.临时申请No.60/916,690的权益。

葡聚糖通常描述为葡萄糖的聚合物且来源于酵母、细菌、真菌和植物例如燕麦和大麦。已知含β(1-3)-连接的吡喃葡萄糖主链的葡聚糖具有生物活性，特别是，它们表现出调控免疫系统，并且近来表现出诱导造血干细胞和祖细胞(HSPC)活动。

之前，生产高质量的可溶β-葡聚糖很昂贵。例如，昂贵的成本抑制其作为营养增补剂或食品成分。因此，需要一种改良的可溶β-葡聚糖。

发明内容

本发明涉及一种粒状可溶的β-葡聚糖。更具体而言，本发明涉及一种改良方法和粒状可溶的β-葡聚糖的组合物。粒状β-葡聚糖在升高的温度和压力下溶解在酸性溶液中。采用例如离心和/或色谱技术可将制得的可溶β-葡聚糖进一步澄清和纯化。制得的产品甚至在还含有高分子量葡聚糖时也可干燥成粉末且随后再溶解。

附图说明

图1-4是粒状可溶的β-葡聚糖样品的RI踪迹和数据转化图。

图5是各种β-葡聚糖诱导TNFa的生产的示意图。

具体实施方式

本发明所用的起始材料是由任何方法制备的粒状，或不可溶的β-葡聚糖。粒状β-葡聚糖起始材料的大小范围可从整个(whole)葡聚糖颗粒小至亚微米大小的颗粒。起始材料中的杂质水平也可变化。但是，随着起始材料中杂质水平的增加，回收的可溶葡聚糖数量会降低。适宜作为起始材料的一个例子是来自Biothera的WGP

许多来源的任意b-葡聚糖都可用于本发明。这些来源的例子为酵母、大麦、燕麦、蘑菇和其他真菌等。

在压力和提高温度下以酸处理粒状β-葡聚糖以产生可溶β-葡聚糖。开始时，将丸化的、粒状β-葡聚糖在缓冲液中再悬浮并混合于可密封反应容器中且调至pH3.6。加入缓冲试剂以使每升总体积的最终悬浮混合物含有约0.61g乙酸钠，5.24ml冰醋酸和430g丸化的，粒状β-葡聚糖。容器经氮气吹扫以去除氧气并增加反应容器内的压力。

通常地，将容器内部压力调至35 PSI，将悬浮液加热至约135℃至多约5.5小时。发现在这样的条件下β-葡聚糖将溶解。随着温度从135℃下降，溶解量也下降。

应该注意的是这个温度和压力仅对上述实施方式是最优的。如果反应条件和/或试剂有任何改变则可能需要优化和调整温度和压力。

增加的压力和温度，通过实质上在工艺中消除使用有害化学物质，使其相对于现有技术中溶解β-葡聚糖的工艺具有优势。之前所用的有害化学物质包括例如可燃的VOC例如醚和乙醇，极强酸例如甲酸和硫酸和极高pH的苛性碱溶液。本工艺不仅更安全，而且通过减少所用的不同化学物质的量和所涉及的步骤数量，更为经济。

本工艺的另一个优势是上述处理的长度控制制得的粒状可溶的β-葡聚糖分子量。如全文所用的术语，“粒状可溶的β-葡聚糖”可以是任何可溶的，粒状状或再溶解形式。处理时间长度与制得的分子量大小负相关。换而言之，随着处理时间的增长，制得的粒状可溶的β-葡聚糖的平均分子量降低。该原理如下文所示。

在上述工艺期间的多个时间点(60，90，120和240分钟)，从一批粒状可溶的β-葡聚糖悬浮液中收集四个样品。通过尺寸排阻色谱对比右旋糖苷分子量标记测定样品的分子量。结果如表1所汇总。

表1