[发明专利]一种人脐带间充质干细胞无血清培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是指一种人脐带间充质干细胞无血清培养基。

背景技术

现有人脐带间充质干细胞培养基含有5-10%的外源动物血清，应用起来有如下不足之处：

1)应用中存在批间差异，需要大量的验证工作；

2)动物血清中含促进生长的活性成分和抑制生长的成分，需测试才知对细胞生长的净作用；

3)血清中蛋白含量高，成分复杂，据报道不下于150种，不利于下游的分离纯化，阻碍了细胞临床应用；

4)外源动物血清常被病毒和支原体污染。

综合以上，动物血清培养基给生产及科研带来许多不利因素。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种人脐带间充质干细胞无血清培养基，具有群体倍增时间短、细胞生长形态佳、细胞线粒体功能强的特点。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现：

一种人脐带间充质干细胞无血清基础培养基，包含无血清动物细胞培养基，生长因子，细胞培养添加物，微量元素。

进一步，所述生长因子为碱性成纤维生长因子（bFGF），白血病抑制因子（LIF），其中，含量为bFGF2-15ng/ml，优选5ng/ml，LIF5-15ng/ml，优选7ng/ml。

进一步，所述细胞培养添加物其包含：胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺，其中，含量为胰岛素5-20mg/L，优选10mg/L，转铁蛋白2-15mg/L，优选5.5g/L，乙醇胺0.5-5mg/L，优选2mg/L。

进一步，所述微量元素为硒粉，含量为硒粉2-10ng/L，优选6.7gn/L。

进一步，所述无血清基础培养基为L-DMEM（低糖培养基）。

本发明提供一种改进的人脐带间充质干细胞无血清培养基，该培养基具有（a）群体倍增时间短，（b）细胞生长形态佳，（c）细胞线粒体功能强等特点。并且他可1.避免批间差异和不明的血清组分对细胞培养的影响；2.避免血清的外源性污染和对细胞毒性作用；3.是产品易于纯化，提高回收率，加速细胞治疗临床应用的进程；4.成分明确，有利于研究细胞的生理调节机制。

附图说明

图1为本发明中的培养基与市售无血清培养基在每代细胞的增殖次数对比。

图2为本发明中的培养基对人间充质细胞培养后，在倒置显微镜下的拍照；

图3为市售无血清培养基对人间充质细胞培养后，在倒置显微镜下的拍照。

具体实施方式

为让本领域的技术人员更加清晰直观的了解本发明，下面将结合附图，对本发明作进一步的说明。

实施例1

根据本发明公开的内容，按照以下组分和配比配置培养基1。

L-DMEM，碱性成纤维生长因子5ng/ml，白血病抑制因子7ng/ml，胰岛素10mg/L，转铁蛋白5.5mg/L，乙醇胺2mg/L，硒粉6.7gn/L。

实施例2

L-DMEM，碱性成纤维生长因子2ng/ml，白血病抑制因子15ng/ml，胰岛素5mg/L，转铁蛋白15mg/L，乙醇胺0.5mg/L，硒粉2gn/L。

实施例3

L-DMEM，碱性成纤维生长因子15ng/ml，白血病抑制因子5ng/ml，胰岛素20mg/L，转铁蛋白2mg/L，乙醇胺5mg/L，硒粉10gn/L。

通过以下对比进行本发明的结果检测和对比。

1.不同培养基培养细胞群体倍增时间比较

取脐带来源的人脐带间充质干细胞为培养对象，采用不同配方的培养基对其进行培养，其增殖能力均从第5代研究至第15代。每代脐带间充质干细胞生长至约100%融合时，0.25%胰酶消化，制备成但细胞悬液，加入0.4%台盼蓝染色2-3分钟。计算每个培养皿中细胞总数和死亡细胞数（死亡细胞被胎盘兰染成蓝色），取平均值，连续10代，并计算每代的平均细胞群体倍增数目PD，绘制累计细胞群体倍增曲线，如图1所示。细胞群体倍增数目PD由下述公式计算得出：PD=（lgNt-lgN0）/lg2，其中Nt：收集细胞数；N0：接种细胞数；t:培养时间，本次采用的是实施例1的配比；

2.不同培养基培养细胞后细胞生长形态比较;

采用不同配方的培养基对人脐带间充质干细胞进行培养，在倒置显微镜下拍照比较，所得结果如图2和图3所示，其中图2为实施例1的产品，图3为市售无血清培养基；

3.细胞线粒体功能比较；