[发明专利]用于在哺乳动物细胞中表达的密码子优化的IL-15和IL-15Rα基因

说明书

相关专利申请的交叉引用

本申请要求享有2006年6月9日提交的美国临时专利申请 60/812,566和2006年1月13日提交的美国临时专利申请60/758,819 的权益，为所有目的其全部内容在此以参考的方式并入本文。

发明领域

本发明涉及哺乳动物细胞中提高的细胞因子表达，通过优化细胞 因子基因表达的所有步骤。

发明背景

白介素-15(IL-15)是一种多效细胞因子，对先天性和获得性免疫系 统非常重要(Diab,等人,Cytotherapy(2005)7:23-35)。IL-15促进中性 粒细胞和巨噬细胞的活化，是树突状细胞(DC)、天然杀伤(NK)细胞、 NKT细胞和CD8+T细胞(Id.)的发育和功能必不可少的。IL-15在淋 巴和非淋巴隔室作用于细胞(VanBelle和Grooten,ArchImmunolTher Exp(2005)53:115)。

基于其多种功能和动物模型中的相对安全性，发现了IL-15给药 在治疗免疫缺陷中的用途，用于T细胞和NK细胞的体外扩增，和作 为疫苗的佐剂，包括抗HIV疫苗(Diab,等人,上述；Ahmad,等人, CurrHIVRes(2005)3:261；AlpdoganandvandenBrink,TrendsImmunol (2005)26:56)。例如，已经发现外源IL-15给药显著增强感染人类免疫 缺陷性病毒(HIV)的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者的免疫细胞功 能(Ahmad,等人,上述；还可参见,Pett和Kelleher,ExpertRevAnti InfectTher(2003)1:83；和Ansari,等人,ImmunolRes(2004)29:1)。 IL-15给药对淋巴组织生成的作用和免疫缺陷病症的治疗也在研究中 (AlpdoganandvandenBrink,上述)。

来自数个研究者的结果已经表明IL-15受体α的天然可溶形式是 IL-15的拮抗剂(参见,Mortier,等人,(2004)J.Immunol.173, 1681-1688；Ruchatz,等人,(1998)J.Immunol.160,5654-566；和Smith, 等人,(2000)J.Immunol.165,3444-3450)。相反，当通过柔性氨基酸连 接区融合到IL-15时，IL-15受体α的sushi结构域已经被认为是IL-15 功能的体外激动剂(JBiolChem.2006Jan20；281(3):1612-9)。可溶性 白介素-15受体α(IL-15Rα)-sushi是通过IL-15Rβ/γ的IL-15作用的选 择性和有效的激动剂(参见,MortierE,等人,JBiolChem.2006 281:1612)。

为了提供用于作为编码核酸或者蛋白给药的治疗性的单独的 IL-15、或者与完整IL-15受体α或者可溶性IL-15受体α组合的IL-15， 非常重要的是发展用于该细胞因子的有效表达载体和有效表达编码核 酸序列。本发明涉及这种需要。

发明简述

本发明提供用于单独的白介素-15(IL-15)以及与完整IL-15受体 α(IL15Ra)或者IL15Ra的可溶形式(IL15sRa)组合的白介素-15(IL-15)的 高水平表达的核酸序列、表达载体和哺乳动物细胞。本发明还提供用 于单独的白介素-15以及与完整IL-15受体α(IL15Ra)或者IL15Ra的可 溶形式(IL15sRa)组合的白介素-15在哺乳动物细胞中高水平表达的方 法。

在一个相关方面，本发明提供用于完整IL-15受体α(IL15Ra)或者 IL15Ra可溶形式(IL15sRa)高水平表达的核酸序列、表达载体和哺乳动 物细胞。本发明还提供用于完整IL-15受体α(IL15Ra)或者IL15Ra可 溶形式(IL15sRa)高水平表达的方法。