[发明专利]一种达托霉素的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及达托霉素沉淀方法技术领域，尤其涉及一种达托霉素的提取方法。

背景技术

达托霉素是一类称为环酯肽类新抗生素家族的第一个产品。它是从小链霉菌（Streptomycesparvus）发酵液当中提取得到的十三个氨基酸组成的结构新颖的环脂肽类抗生素，其中十个氨基酸构成环状结构，在环外癸酸和色氨酸发生酯化。它不仅具有新颖的化学结构，且其作用模式也与任一已获准抗生素不同。它能在多个方面破坏细菌细胞膜功能，由此迅速杀死革兰阳性菌。达托霉素除能作用于大多数临床相关革兰阳性菌外，更重要的是在体外对已呈甲氧西林（methicillin）、万古霉素和利奈唑胺等耐药性分离菌株仍具强力活性。发明内容

达托霉素为发酵产物，通过发酵培养得到的发酵滤液，发酵过程中会产生大量的色素及与达托霉素结构相近似的副产物如脱水达托霉素，因此达托霉素的提取纯化方法较复杂。一般达托霉素产生菌，生产能力不稳定，产量较低，发酵副产物较多，杂质较多，导致后提取工作较为复杂，大大地增加了后序的提纯难度，难以获得高纯度的最终产物，从而无法产业化生产。

对达托霉素后序的提取纯化方法已经有不少文献报导，大致工艺为：发酵液经超滤、纳滤、阳离子树脂吸附酸洗、阴离子树脂中和，纳滤浓缩、结晶。膜过滤收率达到98－99％，产品经结晶后纯度也能得到98.5％以上。但达托霉素是个两性物质，等电点约是pH4-5，在不同的pH条件下，它的溶解性是不同的，尤其是达托霉素存在有大量的同系物、异构体，这些杂质在性质上与达托霉素很相似，因此，通过这么简单的工艺，在产业上要分离纯化甚至结晶达托霉素是很困难的。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种达托霉素的提取方法。

本发明的技术方案如下：本发明提供一种达托霉素的提取方法，包括以下步骤：

a、先将发酵液中达托霉素富集，再将富集得到的达托霉素粗提取，其中粗提取采用酸性柱层析，再用中性柱层析，层析后得到达托霉素发酵液。

b、将达托霉素发酵液调节pH2.0-4.5后，用膜孔径为0.01μm-0.1μm的陶瓷膜进行过滤，然后用pH2.0-4.0的酸性水溶液循环洗涤陶瓷膜，弃滤液，再用pH8-10的碱性水溶液循环洗涤陶瓷膜，收集达托霉素滤液；

c、在沉淀容器中沉淀步骤b中所得的达托霉素，得到晶体，并且搅拌该晶体浆料，将PH值连续调节至所需程度，直至完全沉淀，得到晶体沉淀物；

d、经过冷冻干燥达托霉素制备液得到达托霉素。

本发明优选的，根据步骤c中，通过在含净抗生素活性洗脱液中加入与水互溶的有机溶剂来结晶，结晶前溶液中达托霉素含量为5.0％～30.0％。

本发明优选的，所述机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇或丙酮。

本发明优选的，所述机溶剂加入量为：甲醇为2～6倍结晶液体积；乙醇为1.5～5.5倍结晶液体积；异丙醇为1.2～5倍结晶液体积；丙酮为1.0～4.5倍结晶液体积。

本发明优选的，根据步骤c中，结晶过程起始温度为25～60℃；结晶过程终点温度为0～30℃；结晶过程降温速度为0.5～5℃/分钟。

本发明的有益效果如下：

采用上述方案，本发明通过聚乙烯膜过滤，得到的澄清滤液通过大孔吸附色谱树脂柱，达托霉素被吸附在大孔吸附色谱树脂柱上，沉淀过程易控制，混合液易过滤，得到的达托霉素碱颜色浅，粉末松散，易溶解；本发明具有沉淀方法简便和工艺流程适用于大批量生产的优点。

附图说明

图1为本发明所述一种达托霉素的提取方法的流程图。

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例，对本发明进行详细说明。

请参阅图1，本发明提供一种达托霉素的提取方法，包括以下步骤：

a、先将发酵液中达托霉素富集，再将富集得到的达托霉素粗提取，其中粗提取采用酸性柱层析，再用中性柱层析，层析后得到达托霉素发酵液。

b、将达托霉素发酵液调节pH2.0-4.5后，用膜孔径为0.01μm-0.1μm的陶瓷膜进行过滤，然后用pH2.0-4.0的酸性水溶液循环洗涤陶瓷膜，弃滤液，再用pH8-10的碱性水溶液循环洗涤陶瓷膜，收集达托霉素滤液；