[发明专利]一种意大利石松种子生活力测定方法

权利要求书

1.一种意大利石松种子生活力的测定方法，包括种子引进、种子处理、种皮破除、浸种、配置TTC溶液、染色、鉴定和统计；具体步骤如下：

（1）种子引进

通过购买的方式，经过海关检疫，从国外引进当年成熟饱满的意大利石松种子；

（2）种子处理

2.1种子储藏：将意大利石松种子装在棉布袋中储藏，储藏期间避免烟熏、鼠害、虫害、水湿等；室温保持在13～30℃，相对湿度＜30%；

2.2除杂：将意大利石松种子放在实验台上,去除小的石块、大小和颜色与种子相似的石块杂物、明显发霉和种皮发黑的种子；

2.3水选：将除杂待测的种子放在大烧杯中加蒸馏水浸泡5～10min，然后用玻璃棒连续搅拌3～5min停止，等到液面静止5～20min，去除浮在水面上的种子；而后将沉在烧杯底部的种子取出得水选种子，随即进行下步骤；

2.4种子消毒：将水选种子完全浸泡在质量百分比浓度0.1%的HgCl₂试剂中10～15min，取出，用蒸馏水反复冲洗3～5次得消毒种子，随即进行下步骤；

（3）种皮破除

3.1 浸种

从消过毒种子中随机地选择100粒种子，在常温下用蒸馏水浸泡4～8h后取出种子，用滤纸吸干种子表面的水分，然后进行破皮；

3.2 破皮

在种皮上找到种脐，将绣花针放在种脐部位，然后轻轻地往里扎，在此过程中种皮会出现小的裂缝，就可以通过该裂缝用刀片拨开种皮，去掉黄褐色的内种皮，得到淡黄色的种子；或者，在种皮上找到种脐，然后采用嗑瓜子的方法嗑种皮，当听见种皮破裂的声音时，取下种子，破除种皮，最后，去掉褐色的内种皮，得到淡黄色的种子；

（4）浸种

将淡黄色的种子100粒放在烧杯中,加入100～200mL蒸馏水，然后用玻璃棒搅拌；等到种子完全沉到烧杯底部时，将烧杯放在30 ℃～35 ℃的恒温箱中浸种8～12h，在此期间每隔3～4h,取出烧杯用玻璃棒搅拌；

（5）配置TTC溶液

染色剂采用0.5%的TTC溶液，配置方法如下：称取 0.5g TTC 放入小烧杯中，先加少许乙醇用玻璃棒搅拌溶解后，再用蒸馏水稀释定容至 100mL；TTC 溶液最好随用随配，不宜久藏；溶液应遮光贮藏，若已变为红色，则不能继续使用；

（6）染色

将经步骤（4）浸种后充分吸水的种子放入配好的TTC溶液中，然后放入恒温箱进行染色，恒温箱的温度设置为 30~35℃，染色过程中每隔3～4h用玻璃棒搅拌1～2 min，使溶液换气，染色时间14~20h；

（7）鉴定和统计

将已经染色的种子从TTC溶液中取出,用蒸馏水反复冲洗3～5次，然后用滤纸吸干种子表面的水分；而后用解剖刀片沿着种子的长轴方向将种子切成两半，任取其中一半，将被切平的一面朝上平铺在玻璃板上，放置10～15min，然后进行种子生活力的鉴定；鉴定标准如下：凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生活力的种子，种胚不被染色的为死种子；如果种胚中非关键性部位被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子；生活力=N/100×100%，其中：N 代表已经染色的种子数。