[发明专利]一种阿巴卡韦个体化用药检测试剂盒及其方法

说明书

本发明提供一种阿巴卡韦个体化用药检测试剂盒及其方法，属于阿巴卡韦用药检测技术领域。本发明采用Allele‑Specific LAMP技术，针对rs2395029的G等位基因设计了特异引物，利用rs2395029的G等位基因与HLA‑B*5701的关联性判断患者是否携带HLA‑B*5701等位基因。测试后，观察反应体系的状态变化(是否有沉淀或者颜色的变化)即可判断是否发生阳性反应，肉眼即可进行判断，无需额外的装置设备，简便易行。

技术领域

本发明涉及阿巴卡韦用药检测技术领域，尤其涉及一种阿巴卡韦个体化用药检测试剂盒及其方法。

背景技术

阿巴卡韦(abacavir，简称ABC,商品名：Ziagen)是一种抗艾滋病新药，为新的碳环2'-脱氧鸟苷核苷类药物，其口服生物利用度高，易渗入中枢神经系统。与其他核苷类逆转录酶抑制剂一样，阿巴卡韦是一个无活性的前药，在体内经4个步骤代谢成为具活性的三磷酸酯，并通过以下2条途径发挥抑制人免疫缺陷病毒(HIV)逆转录酶的作用：①竞争性地抑制2'-脱氧鸟苷三磷酸酯(dGTP)(DNA合成片段之一)结合进入核酸链；②通过阻止新碱基的加入而有效地终止DNA链的合成。

近年来的研究表明，HLA-B基因的多态性与药物不良反应的发生密切相关。2008年美国食品药品监督管理局(FDA)发布有关阿巴卡韦和含阿巴卡韦药物的安全信息，指出携带HLA-B*5701基因的HIV感染者使用阿巴卡韦更易发生阿巴卡韦超敏反应(ABCHSR)。阿巴卡韦超敏反应是一种多器官综合征，会出现两种或两种以上的体征或症状，包括发热、皮疹、胃肠道反应、呼吸系统反应和全身性反应。超敏反应通常出现在治疗早期或治疗开始的前六周，然而，由于症状较多以及合并用药的影响，难以在早期确诊。

CFDA在2015年发布的《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)》中指出：“携带HLA-B*5701等位基因者慎用阿巴卡韦，以免引起药物性肝损害。”因此，HIV感染者在使用ABC药物之前，必须筛查HLA-B*5701基因，当检测结果为阴性，即患者不携带HLA-B*5701基因方可使用ABC药物。

HLA-B*5701的检测手段主要有血清学检测法、PCR-直接测序法(PCR-SBT)和荧光PCR法，然而通过血清学检测进行HLA分型，结果并不精确。现在一般则是通过测序来分析HLA的基因型，尽管这种方法能得到最准确的基因序列信息，但是消耗时间较长且成本较高，并不适合在检测时大规模推广，所以在临床上并不适用；荧光PCR法虽然相对操作容易，耗时也少于直接测序法，但是依旧依赖于较为昂贵的检测设备和探针，很难在偏远或经济欠发达的地区普及推广。因此，有必要开发出能以极低的成本快速准确得检测HLA-B*5701的方法。

新近研究发现，在HLA-B基因座附近的SNP位点rs2395029的G等位基因与HLA-B*5701高度连锁，二者的敏感性为100％，这为HLA-B*5701的检测提供了一个新的视角，即我们可以通过避免直接对HLA-B的序列分析，而只是检测rs2395029的碱基状况来间接得知检测样本是否存在HLA-B*5701。

环介导等温扩增(Loop-mediated Isothermal Amplification，LAMP)技术是日本科学家于2000年开发出来的一种恒温扩增技术，针对靶基因的六个区域设计四条特异性引物，在链置换DNA聚合酶的作用下恒温扩增，可在十几分钟到一小时之内产生10⁹-10¹⁰数量级的产物，反应结束后通过肉眼直接观察体系状态的改变来判定待测样本的基因型，无需开管，因此大大简化了操作步骤，同时又可以有效避免样本交叉污染，而且，仅需普通水浴锅即可开展检测，又节约了大量的检测成本。因此，采用LAMP方法检测HLA-B*5701的基因型是一种新型且适于大规模使用的方法。

发明内容

本发明要解决的问题是现有的检测HLA-B*5701的方法不理想，不适于大规模推广使用。