[发明专利]中国儿童哮喘易感基因SNP分型用试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种中国儿童哮喘易感基因SNP分型用试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括以下内容：

（1）PCR反应试剂：包括10×PCR缓冲液、Mg²⁺离子、底物dNTP、FastTaq酶，SNaPshot混合液，GCbuffer；

（2）按一定比例混合的针对8个哮喘易感基因9个区段进行多重PCR扩增的正向引物和反向引物；

（3）按一定比例混合的针对8个哮喘易感基因9个SNP位点的PCR延伸引物；

（4）PCR产物纯化试剂：包括核酸外切酶、虾-碱性磷酸酶及其配套的缓冲液；

（5）对照标本：包括单个SNP位点纯合、杂合突变的阳性对照标本、阴性对照标本；

所述试剂盒以ADRB2基因rs1042713位点、IL-4Rα基因rs1805010位点、IL-13基因rs20541位点、IL-13基因rs1800925位点、IL-13Rα基因rs2495636位点、IL-4基因rs2243250位点、TNF-α基因rs1800629位点、MS4A2基因rs569108位点、ADAM33基因rs528557位点为检测对象，针对每个SNP位点的突变分别设计出扩增引物和延伸引物，针对各个SNP位点进行多重PCR扩增和标记延伸，通过毛细管电泳分析，同时获得9个SNP位点的基因型；

所述ADRB2基因rs1042713位点扩增的正向引物和反向引物是5’-ACACCACAGCCGCTGAATG-3’和5’-TGGCCAGGACGATGAGAGAC-3’；

所述IL-4Rα基因rs1805010位点扩增的正向引物和反向引物是5’-AAGAGTCTGATGCGGTTCCTG-3’和5’-TTGAAGGAGCCCTTCCACAG-3’；

所述IL-13基因rs20541位点扩增的正向引物和反向引物是5’-AATCTGCAACTTCAATAGTC-3’和5’-GTAAAGGACCTGCTCTTAC-3’；

所述IL-13基因rs1800925位点扩增的正向引物和反向引物是5’-ATCAACACCCAACAGGCAAAT-3’和5’-CCAGCGTCTCCAGGACTTATT-3’；

所述IL-13基因rs1800925位点扩增的正向引物和反向引物是5’-ATCAACACCCAACAGGCAAAT-3’和5’-CACCAGTCTCTGCAGGATCAAC-3’；

所述IL-4基因rs2243250位点扩增的正向引物和反向引物是5’-TGCAGTGATCCCTGATCACAAC-3’和5’-AGAGGCAGAATAACAGGCAGACT-3’；

所述TNF-α基因rs1800629位点扩增的正向引物和反向引物是5’-CACAGGCCTCAGGACTCAACA-3’和5’-TCTTCTGGGCCACTGACTGAT-3’；

所述MS4A2基因rs569108位点扩增的正向引物和反向引物是5’-CAAGACCTTGGCCTTCTGGA-3’和5’-AGCGTGAGACCCAGAAAGACA-3’；

所述ADAM33基因rs528557位点扩增的正向引物和反向引物是5’-AACCGCAGGAGTAGGCTCAG-3’和5’-CCGCAGACCATGACACCTTC-3’；

所述ADRB2基因rs1042713位点位点的延伸引物是(T)₂₁CGGCGCATGGCTTC；

所述IL-4Rα基因rs1805010位点的延伸引物是(T)₂₃GCAGAGCCCACACGTGT；

所述IL-13基因rs20541位点的延伸引物是(T)₂₈CGAAGTTTCAGKTGAAC；

所述IL-13基因rs1800925位点的延伸引物是(T)₃₃GAGGACTTCTAGGAAAA；

所述IL-13Rα基因rs2495636位点的延伸引物序列是(T)₃₆GTTATCTGGGAACTTATTA；

所述IL-4基因rs2243250位点的延伸引物是(T)₂₄TACCCCAGCACTGGGG；

所述TNF-α基因rs1800629位点的延伸引物是(T)₂₆ATAGGTTTTGAGGGGCATG；

所述MS4A2基因rs569108位点的延伸引物是(T)₃₃GTTGGAAGACCCAGGGG；

所述ADAM33基因rs528557位点的延伸引物是(T)₄₀GCCTCTGCTCCCAGG。