[发明专利]一种细胞保存液及其在保护巨核祖细胞活力中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及细胞培养领域，尤其涉及一种细胞保存液及其在保护巨核祖细胞活力中的应用。

背景技术

巨核细胞祖细胞(megakaryocyteprogenitorcell)是一种使人们产生巨核细胞的细胞，它是从骨髓祖(CFU-GEMM)而得，简称巨核祖细胞。巨核祖细胞存在于IL-6R-细胞群中，而CD34+细胞可分为两个细胞亚群，表达IL-6R和不表达IL-6R，IL-6R+细胞能被刺激形成粒-巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞，而IL-6R-细胞当被给予IL-6/sIL-6R时可形成红系及巨核系细胞。造血干细胞首先分化生成巨核系祖细胞，也称巨核系集落形成单位(colonyformingunit-megakaryocyte,CFU-Meg)。巨核系祖细胞分化成为成熟的巨核细胞后，其边缘部分破裂脱落，形成血小板，每个巨核细胞能生成1000-6000个左右的血小板；巨核细胞虽然在骨髓的造血细胞中为数最少，仅占骨髓有核细胞总数的0.05％，但其产生的血小板却对机体的止血功能极为重要。

如今恶性肿瘤严重危害人类健康的主要疾病之一，目前主要是通过手术治疗并结合放化疗。当患者在接受高剂量放化疗后，骨髓造血功能低下，常会出现血小板减少，严重时会造成患者出血死亡。临床上常采用输注血小板，但血小板来源有限，存活期短，体外易失活，且反复输注血小板易导致输注无效并增加输血传播疾病的危险。

1997年，Bertolini等从外周血中分离CD34+，体外诱导扩增巨核细胞7天，用于患者血小板恢复。结果显示，体外诱导的巨核细胞可替代血小板输入，或减少血小板输入次数。2000年，Paquette等将体外动员的外周血细胞经体外诱导扩增巨核细胞9天后，用于改善大剂量化疗的乳腺癌病人中性粒细胞减少、血小板减少和贫血症状。VandenOudenrijn等对外周血、骨髓、脐血来源的CD34+细胞体外扩增进行比较，发现脐血来源的CD34+具有更强的巨核细胞扩增能力。由于脐血造血干细胞移植后血小板的恢复较外周血、骨髓慢，因此采用体外诱导、扩增巨核祖细胞和巨核细胞，然后输注患者体内，进一步发育成血小板，缩短血小板的恢复期。将巨核祖细胞用于恶性肿瘤的治疗是目前的研究热点，因此，如何保存巨核祖细胞的使其活性得到保证，细胞不受到损伤称为了目前研究的又一难题。

现有技术只采用生理盐水保存巨核祖细胞，进行普通保温箱保存运输，其缺点之一在于只用生理盐水保存巨核祖细胞，在保存或运输过程中不能给细胞提供相应的营养保证，细胞活性维持时间短，并且细胞容易聚集在一起。

因此，进一步开发适用于巨核祖细胞的保存液十分必要。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种细胞保存液及其在保护巨核祖细胞活力中的应用。本发明提供的细胞保存液能够有效保护巨核祖细胞的活力。

本发明提供的细胞保存液包括水、叶酸、白蛋白、黄芪提取物和氯化钠。

叶酸(folicacid)也叫维生素B9，是一种水溶性维生素，是集体细胞生长和繁殖所必须的物质，有促进骨髓中幼细胞成熟的作用。

白蛋白(又称清蛋白，albumin，Alb)是血浆中含量最多、分子最小、溶解度大、功能较多的一种蛋白质，具有保护血细胞保护和调节凝血的功能。

黄芪提取物中包括黄芪甲苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素，具有良好的抗氧化作用。

氯化钠用于维持细胞渗透压的平衡。

本发明利用水、叶酸、白蛋白、黄芪提取物和氯化钠配制成为细胞保存液，能够在保存过程中提供给细胞相应的营养，从而维持细胞的活性，使细胞不易聚集或死亡。

本发明所采用的黄芪提取物可为自制也可为市场购得，本发明对此不做限定，其实施皆在本发明的保护范围之内。

在本发明提供的实施例中，黄芪提取物中包括黄芪甲苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素。

在本发明提供的实施例中，黄芪甲苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素的质量比为1:1:1。

在本发明的实施例中，黄芪提取物中黄芪甲苷、毛蕊异黄酮和芒柄花素的质量之和在黄芪提取物中的质量分数不低于90％。

在本发明的实施例中，白蛋白为人血白蛋白。

虽然白蛋白也能起到一定的保护细胞的作用，但是实验结果表明，仅采用生理盐水和白蛋白对细胞进行保护的效果远不及本发明提供的保护液。

在本发明提供的实施例中，叶酸、白蛋白、黄芪提取物和氯化钠的质量比为(0.005～0.01)：(2～4)：(5×10^-5～10^-4)：(0.54～0.63)。