[发明专利]一种改进的9k固体培养基制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种改进的9k固体培养基制备方法。

背景技术

氧化亚铁硫杆菌是最重要的脱硫微生物之一，以氧化二价铁、元素硫以及还原态硫化物等获得能量，同时实现脱硫，有非常重要的应用价值。9k固体培养基是氧化亚铁硫杆菌分离、培养和保存最常用的培养基。但在该培养基的原制备方法中，盐溶液(A液)和琼脂溶液(B液)分别湿热灭菌，温度降至60℃左右时将A、B液混合均匀，由于琼脂溶液的存在，两者混合均匀并不易进行，需要一定的控制力度，力度不足会导致A、B液混合不均匀，影响培养基的凝固时间、质量和强度，致使细菌划线、涂布等操作失败；而力度过大又会使培养基溶液出现泡沫，形成固体培养基后影响菌落生长。此外，培养基溶液混合必须在足够短的时间内完成，以避免琼脂凝固影响混匀过程。因此，现有9k固体培养基制备方法存在明显不足，严重影响氧化亚铁硫杆菌的分离和培养效率，故有必要对现有9k固体培养基的制备方法进行改进。

发明内容

本发明旨在改进9k固体培养基的制备方法，提高9k固体培养基的质量，以解决9k固体培养基制备不易操作和培养基质量不稳定的问题。

本发明的技术方案为：改进的9k固体培养基配方由A、B两部分组成，A：(NH₄)₂SO₄3.0g，KH₂PO₄0.5g，KCl0.1g，MgSO₄·H₂O0.5g，Ca(NO₃)₂·2H₂O0.01g，琼脂18.0g，溶于900mL蒸馏水，混合均匀，用NaOH溶液调节pH至7.0；B：FeSO₄·7H₂O44.2g溶于100mL蒸馏水。将A溶液于121℃湿热灭菌15min，B过滤除菌，待A冷却至60℃左右在无菌条件下加入3mL无菌稀硫酸溶液(体积分数5.5％)，然后将A、B混合，用灭菌玻璃棒轻轻搅拌使其混合均匀，倒入培养皿，凝固后即可得到质量较好、pH为2.0的9k固体培养基。

本发明取得的技术进步是:

1、本发明在湿热灭菌前将琼脂与盐溶液直接混合，经过灭菌过程两种溶液混合极为均匀，避免了两者分别灭菌再混合时力度不易控制的问题。此外，本发明将用于调节培养基pH的稀H₂SO₄溶液与A、B液混合均匀，要比原方法中将琼脂溶液与A、C液混合均匀要容易进行得多。因此，改进后的方法大大提高了9k固体培养基的制备成功率(100％)，而原制备方法的成功率仅为75％，且伴有培养基质量不高的问题。

2、本发明的9k固体培养基质量、弹性和承力强度明显高于原制备方法，非常适用于微生物划线、涂布等操作，不必担心固体培养基被划破的问题。

3、本发明的9k固体培养基更有助于氧化亚铁硫杆菌的生长和菌落的形成，菌落形成时间比原方法缩短33.3％。

具体实施方式

实施例1：按照改进后的方法制备培养基，高质量9k固体培养基的成功率为100％，培养基弹性、承力强度都较好，且平板中鲜有泡沫出现；

按照原方法制备9k固体培养基

A：(NH₄)₂SO₄3.0g，KH₂PO₄0.5g，KCl0.1g，MgSO₄·H₂O0.5g，Ca(NO₃)₂·2H₂O0.01g，溶于650mL蒸馏水，用1:1硫酸溶液调节pH至2.0；

B：琼脂18.0g，溶于250mL蒸馏水，用1:1硫酸溶液调节pH至7.0；

C：FeSO₄·7H₂O44.2g，溶于100mL蒸馏水。

将A、B液分别121℃15min高压蒸汽灭菌，C过滤除菌，待A和B液冷却至60℃左右与C液共同混合均匀，倒入培养皿，获得固体培养基的成功率为75％，且常遇到固体培养基有泡沫、承力强度较低的问题，导致划线、涂布操作失败。

实施例2:将本发明的9k固体培养基和原方法制备的固体培养基分别切成面积1cm×1cm、2cm×2cm、3cm×3cm，厚度为2mm的立方体，用重力法分别测定受力值，平行测定6次，受力均值见表1。

表1两种方法配制的9k固体培养基受力均值比较