[发明专利]一种鸡传染性鼻炎单克隆抗体制备方法

权利要求书

1.一种鸡传染性鼻炎单克隆抗体制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)取B型副鸡禽杆菌菌液作为抗原，与弗氏完全佐剂乳化后皮下注射小鼠，再于2周后、4周后以相同方法各免疫1次，6周后以相同剂量抗原腹腔注射小鼠；

2)3天后，取上述小鼠的脾脏细胞与骨髓瘤细胞按5:1的细胞量比混合在一支融合管中，1000rpm离心10min，混匀，在37℃水浴中45s内加入1mLPEG到融合管中，混匀，而后在90s内滴加30mL的DMEM培养基，37℃静止10min，而后1000rpm离心10min；弃上清，用60mLHAT培养基悬浮沉淀细胞，再加入腹腔巨噬细胞，置37℃5％CO₂培养箱内培养；

3)利用间接ELISA检测的方法，对步骤2)上清液中的抗体进行检测，筛选出抗体阳性杂交瘤细胞；

4)取小鼠，以0.5mL/只的剂量腹腔注射灭菌液体石蜡，1周后以1×10⁶CFU/只的剂量对小鼠腹腔注射步骤3)得到的杂交瘤细胞，而后从小鼠腹腔采集腹水，离心取上清，即得到鸡传染性鼻炎单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤1)所述的小鼠是6周龄BALB/c小鼠。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中所述PEG的温度是37℃。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中所述DMEM培养基的温度是37℃。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中所述的DMEM培养基是不完全DMEM培养基。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤2)中置37℃5％CO₂培养箱内培养5d后用新鲜的HAT培养基换出一半培养基，10d后用预热的HT培养基换出HAT培养基。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3)中用免疫小鼠血清作为阳性对照，用非免疫小鼠血清作为阴性对照。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤3)筛选出抗体阳性杂交瘤细胞后，先制备其亚克隆细胞株，再利用所述亚克隆细胞株执行步骤4)。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤4)所述的小鼠是8周龄的BALB/c小鼠。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述离心的操作条件是2500rpm离心10min。