[发明专利]一种从葛根中同时分离纯化葛根素和大豆苷元的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从葛根中同时分离纯化葛根素和大豆苷元的方法，属医药领域。

背景技术

葛根为豆科植物葛Puerarialobata的干燥根，是卫生部批准的药食同源类植物，被广泛用于保健食品和生物医药等领域^[1]。现代医学研究表明葛根具有消炎解热、扩张冠状动脉血管、抗心律失调、生津止渴等多种药理作用，对高血糖、高血脂、高血压和心脑血管疾病也具有一定的疗效。

葛根素(8-β-D-葡萄吡喃糖-4',7-二羟基异黄酮)是葛根中主要的功能性异黄酮成分，具有很好的药用与保健价值。作为一种天然生物活性成分，人们对葛根素的药理特性已进行了广泛研究。据相关报道，葛根素具有舒张血管、保护心脏、消炎、抗氧化、抑制酒精导致的运动失常等症状；此外，葛根素可以抑制由于持续高血糖引起的糖基化终端产物的产生，可用于治疗糖尿病及视网膜疾病；葛根素还可以抑制帕金森症细胞内的多种物质的基因表达，并具有类雌激素活性可用于预防女性更年期病症。葛根素的药理功效显著，作用独特，具有很好的临床应用与产品开发的前景。

除葛根素外，葛根中还含有葛根素-6″-O-葡萄糖苷、大豆苷、大豆苷元等其他异黄酮成分。目前，已公开的专利中有许多关于葛根中异黄酮功能成分分离纯化的方法，但大多只关注于葛根素单一成分的分离，对其他异黄酮成分未加以利用，造成资源的浪费。现有提取方法提取效率低，或使用大量有机溶剂，成本高且较难以实现工业化应用。

发明内容

本发明在于提供一种克服现有技术缺点，尽量减少有机溶剂的使用，并易于实现工业化应用的从葛根中同时分离纯化葛根素和大豆苷元的方法。本发明方法是通过以下步骤来实现的：

(1)干燥葛根粉碎后过40目筛制成葛根粉，按1公斤葛根粉加入10L1％β-环糊精水溶液，在20-40℃条件下搅拌提取30min，取提取液；将料渣进行二次提取，并合并提取液；

(2)将提取液流过H103大孔树脂床，进行吸附操作；

(3)用4倍柱床体积水清洗树脂床，然后用4倍柱床体积的75％乙醇进行洗脱操作，收集洗脱液，浓缩回收乙醇；

(4)往浓缩液中加HCl至HCl浓度为2mol/L，并在90℃水浴条件下酸解60min；

(5)酸解液趁热过滤，往滤液中加5倍体积水稀释后流过H103大孔树脂床，进行吸附操作；

(6)用4倍柱床体积水清洗树脂床，然后用4倍柱床体积的50％乙醇进行洗脱操作，收集洗脱液，并浓缩回收乙醇；浓缩液在4℃条件下贮存24h，收集沉淀得到葛根素；

(7)用4倍柱床体积的95％乙醇对树脂柱进行洗脱操作，收集洗脱液，并浓缩回收乙醇；往浓缩液中加入等体积的水，在4℃条件下贮存24h，收集沉淀得到大豆苷元。

为了达到更好的技术效果：

步骤(2)将提取液优选以100ml/min通过H103大孔树脂床。

步骤(3)用4倍柱床体积蒸馏水优选以50ml/min的流速清洗树脂床。

步骤(3)75％的乙醇溶液优选以以50ml/min的流速对树脂进行洗脱。

步骤(5)优选以25ml/min流速通过H103大孔树脂床。

步骤(6)用4倍柱床体积水优选以10ml/min的流速清洗树脂床，然后用4倍柱床体积的50％乙醇优选以10ml/min的流速进行洗脱操作。

本发明：(1)在提取步骤，在水溶液中加入1％的β-环糊精，获得了对异黄酮的高提取效率。用水溶液代替乙醇溶液，实现了绿色提取；并且提取液直接上柱，无需浓缩回收乙醇，节约了能源；(2)通过大量实验发现H103树脂具有突出的吸附葛根异黄酮效果(图1)；(3)利用葛根素为C-糖苷化合物，很难被酸水解，而其O-糖苷衍生物如葛根素-6”-O-葡萄糖苷等可以被酸水解的特点。通过酸水解将葛根素O-糖苷衍生物转化为葛根素，将大豆苷转化为大豆苷元(图2)；(4)利用葛根素和大豆苷元极性差异，用50％乙醇从H103树脂洗脱葛根素，用95％乙醇洗脱大豆苷元，实现二者分离(图3)；(5)本发明仅在树脂洗脱时少量使用乙醇，无需使用其他有机溶剂，树脂吸附解析后可重复利用，所有步骤均可放大实现工业化应用，真正实现了绿色分离纯化。

本发明的有益效果：绿色分离纯化；提取效率高，所得产品收率高、纯度好；能实现同时分离得到高纯度的葛根素和大豆苷元；工艺简单，容易推广。

附图说明

图1六种市售树脂对葛根素的平衡吸附等温线(25℃)