[发明专利]焦磷酸测序法检测ALDH2基因分型的引物对及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外核酸检测技术领域，尤其涉及一种焦磷酸测序法检测乙醛脱氢酶2(ALDH2)基因分型的引物对及试剂盒。

背景技术

人类乙醛脱氢酶(Aldehydedehydrogenasegene，ALDH)是一种四联体蛋白，催化乙醛和其他脂肪族醛氧化。目前，已发现ALDH有19种同工酶，主要有ALDH1～4四种，其中ALDH2最为重要。在肝和胃中具有很高的表达量，是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。

ALDH2基因位于人类第12号染色体(12q24.2)，它的主要多态性是rs671，即位于外显子12的G1510A。由于ALDH2基因存在G1510A多态性，导致氨基酸序列第487位上的谷氨酸被赖氨酸所替换(即，Glu487Lys)，其中具有催化活性的野生型称为G等位基因(即，ALDH2*1)，而催化能力失活的变异型称为A等位基因(即，ALDH2*2)。统计表明，在亚洲的黄种人群中，ALDH2*2是频率最高且最重要的突变型。

研究发现，突变型基因ALDH2*2的存在能导致ALDH2活力的严重缺失，并与过度饮酒导致的酒精依赖、酒精性中毒、酒精性肝病及消化道癌症等疾病之间存在深刻的联系。

一、ALDH2与酒精性疾病的关系：

乙醛脱氢酶(ALDH)和乙醇脱氢酶(Alcoholdehydrogenase，ADH)在人体内共同组成了人体乙醇脱氢酶系，负责催化人体的乙醇分解代谢。ALDH2在肝和胃中具有很高的表达量,是乙醇代谢途径中最重要的酶之一。

肝中的乙醇脱氢酶负责将乙醇(酒的成分)氧化为乙醛，生成的乙醛作为底物进一步在乙醛脱氢酶催化下转变为无害的乙酸(醋的成分)。乙醛毒性高于乙醇，是造成宿醉的主要原因之一。而且乙醛被怀疑具有致癌性，它与人类肿瘤的发生存在一定的关系。负责人体内乙醛转化的主要是肝中的乙醛脱氢酶(ALDH)。

因此，过度的饮酒行为，不仅使ALDH2*2携带者对酒精产生依赖,还可能引起肝癌等的酒精性肝病(Alcoholicliverdisease,ALD)。酒精性肝病是长期、大量饮酒所引起的肝脏病变,已成为现代社会的主要健康隐忧之一。研究显示，携带ALDH2变异基因型者大量饮酒将显著增加罹患肝癌的危险性。

二、ALDH2与硝酸甘油治疗的关系：

硝酸甘油是治疗心绞痛的经典药物，研究发现硝酸甘油的舒血管作用是通过释放一氧化氮(NO)所介导。但临床上部分病人舌下含服硝酸甘油不仅不能迅速有效地缓解心绞痛，反而使心肌缺血加重。近来发现，ALDH2与硝酸甘油转化为NO密切相关。有研究表明，ALDH2*1基因型的患者硝酸甘油治疗心绞痛的疗效明显优于ALDH2*2患者，且前者迅速起效率也明显高于后者。

三、ALDH2与其他疾病的关系：

虽然摄入人体的乙醇有90％以上是在肝脏内完成代谢过程的，但其在摄入过程中与消化道上皮细胞的直接接触也不容忽视。在饮酒人群中，尤其是重度饮酒者，由于其上消化道长期地与大量酒精直接接触，该区域出现癌变(如食道癌、口咽癌等)的几率明显提高。研究发现，ALDH2*2突变与饮酒人群患消化道癌的风险之间具有显著的相关性。此外，ALDH2*2突变与胃癌的易感性也存在一定的相关性。由此可见，ALDH2*2突变是增加区域性癌化几率的重要因素之一。

综上所述，对患者进行ALDH2基因分型检测，具有显著的临床意义：

通过检测ALDH2基因分型，了解其对药物代谢速率快与慢的状况，可以适时合理调整相关药物用药剂量，提高疾病疗效及降低治疗过程中的毒副反应发生概率；

通过检测ALDH2基因分型，指导临床治疗过程中正确使用硝酸甘油，减少用药无效情况；

通过检测ALDH2基因分型，揭示个体酒精代谢能力的差异，从而防止个体过量饮酒、降低酒精性中毒以及肝脏癌病的几率；

通过检测ALDH2基因分型，揭示重大疾病的高危倾向，如ALDH2基因与食道癌、口咽癌、胃癌、冠心病及心肌梗死等风险的相关性；检测结果将对指导患者的日常生活大有助益，也将有助于医生给与其指导意见，对相关疾病预防和恶化的临床干预具有重大意义。