[发明专利]川油36油菜育性恢复基因及纯度和纯合度检测方法

权利要求书

1.一种获取川油36油菜育性恢复基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)、以川油36油菜恢复系为父本，以不育系做母本进行杂交，得到F1代种子后播种，并将处于花期的F1单株套袋自交，得到F2代种子；

2)、将F2代种子播种，在花期得到可育单株和不可育单株；

3)、分别提取多个所述可育单株、不可育单株的总DNA后进行混合，得到可育混合DNA和不可育混合DNA；

4)、分别以所述可育混合DNA和不可育混合DNA为模板，以SSR引物或SRAP引物进行扩增并将产物进行电泳检测，筛选出可育混合DNA能够扩增出，但不可育混合DNA不能扩增出的片段；

5)、将所述片段测序后，进行比对，筛选得到目标片段，并以如SEQ ID No：6和SEQ IDNo：7所示的引物进行扩增，得到全长的川油36油菜育性恢复基因；

所述川油36油菜育性恢复基因的碱基序列如SEQ ID No：1所示。

2.一种利用权利要求1所述的川油36油菜育性恢复基因检测川油36油菜恢复系纯度的方法，其特征在于，包括如下步骤：

提取待检测川油36油菜的总DNA作为模板DNA，以如SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示序列的引物进行PCR，对扩增产物进行电泳检测，并判断待检测川油36油菜是否含有所述油菜育性恢复基因的片段。

3.根据权利要求2所述的川油36油菜育性恢复基因检测川油36油菜恢复系纯度的方法，其特征在于，所述待检测川油36油菜包括川油36油菜恢复系的种子或植株。

4.根据权利要求2所述的川油36油菜育性恢复基因检测川油36油菜恢复系纯度的方法，其特征在于，该方法具体包括：

提取待检测川油36油菜的总DNA作为模板DNA，以如SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示序列为恢复基因引物；以SEQ ID No：4和SEQ ID No：5所示序列为不育基因引物进行PCR扩增，将扩增产物进行电泳检测；

通过电泳检测待测川油36油菜是否含有所述油菜育性恢复基因的片段、不育基因的片段，判断待检测川油36油菜的纯度和纯合度。

5.根据权利要求4所述的川油36油菜育性恢复基因检测川油36油菜恢复系纯度的方法，其特征在于，所述待检测川油36油菜包括川油36油菜恢复系、所述川油36油菜恢复系与不育系杂交后产生的F1代的种子或植株。

6.根据权利要求5所述的川油36油菜育性恢复基因检测川油36油菜恢复系纯度的方法，其特征在于，所述PCR扩增的过程中，所述恢复基因引物与所述不育基因引物的体积比为9:1。

7.根据权利要求6所述的川油36油菜育性恢复基因检测川油36油菜恢复系纯度的方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：

模板DNA1.8-2.2μL；SEQ ID No：4和SEQ ID No：5所示序列的不育基因引物各0.18-0.22μL；SEQ ID No：2和SEQ ID No：3所示序列的恢复基因引物各1.62-1.98μL；MIX 8-10μL；水补至20μL。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤3)中，具体包括：

分别提取100-150株所述可育单株、不可育单株的总DNA；再分别从可育单株的总DNA以及不可育单株的总DNA中抽取80-120个样本DNA，分别进行混合，得到可育混合DNA和不可育混合DNA。

9.根据权利要求1或8所述的方法，其特征在于，在步骤5)中，所述扩增的反应体系为：

目标片段2μL，dNTP 2μL，buffer 2μL，上下游引物各1μL，高保真Taq酶0.2μL，ddH₂O11.8μL。