[发明专利]焦磷酸测序法检测MTHFR基因分型的引物对及试剂盒

权利要求书

1.一种焦磷酸测序法检测MTHFR基因分型的引物对，其特征在于，所述MTHFR基因检测的多态性位点为MTHFRC677T和/或MTHFRA1298C，所述引物对包括：

(1)对于MTHFRC677T等位基因，

扩增引物为：

MTHFRC677T正向扩增引物：

5’-GCCAGCCTCTCCTGACTGTC-3’；

MTHFRC677T反向扩增引物：

5’-TCGGTGCATGCCTTCACA-3’；

MTHFRC677T测序引物：5’-TGCGTGATGATGAAAT-3’；

其中，所述MTHFRC677T正向扩增引物的5’端进行生物素标记；

(2)对于MTHFRA1298C等位基因，

扩增引物为：

MTHFRA1298C正向扩增引物：

5’-AGGAGCTGCTGAAGATGTGG-3’；

MTHFRA1298C反向扩增引物：

5’-CTCCCGAGAGGTAAAGAACGAA-3’；

MTHFRA1298C测序引物：5’-AGGAGCTGACCAGTGA-3’；

其中，所述MTHFRA1298C反向扩增引物的5’端进行生物素标记。

2.一种焦磷酸测序法检测MTHFR基因分型的试剂盒，其特征在于，所述MTHFR基因检测的多态性位点为MTHFRC677T和/或MTHFRA1298C，所述试剂盒包括：

(1)对于MTHFRC677T等位基因，

MTHFRC677T正向扩增引物：

5’-GCCAGCCTCTCCTGACTGTC-3’；

PCR反应液1，所述PCR反应液1含有MTHFRC677T反向扩增引物：5’-TCGGTGCATGCCTTCACA-3’；

MTHFRC677T测序引物：5’-TGCGTGATGATGAAAT-3’；

其中，所述MTHFRC677T正向扩增引物的5’端进行生物素标记；

(2)对于MTHFRA1298C等位基因，

MTHFRA1298C反向扩增引物：

5’-CTCCCGAGAGGTAAAGAACGAA-3’；

PCR反应液2，所述PCR反应液2含有MTHFRA1298C正向扩增引物：5’-AGGAGCTGCTGAAGATGTGG-3’；

MTHFRA1298C测序引物：5’-AGGAGCTGACCAGTGA-3’；

其中，所述MTHFRA1298C反向扩增引物的5’端进行生物素标记。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：

MTHFRC677T阳性对照品1，其为插有SEQIDNO.8所示核苷酸序列的MTHFRC677T野生纯合子质粒；

MTHFRC677T阳性对照品2，其为所述MTHFRC677T野生纯合子质粒与插有SEQIDNO.9所示核苷酸序列的MTHFRC677T突变纯合子质粒组成的质粒混合物；

MTHFRC677T阳性对照品3，其为插有SEQIDNO.9所示核苷酸序列的MTHFRC677T突变纯合子质粒；

MTHFRA1298C阳性对照品1，其为插有SEQIDNO.10所示核苷酸序列的MTHFRA1298C野生纯合子质粒；

MTHFRA1298C阳性对照品2，其为所述MTHFRA1298C野生纯合子质粒与插有SEQIDNO.11所示核苷酸序列的MTHFRA1298C突变纯合子质粒组成的质粒混合物；

MTHFRA1298C阳性对照品3，其为插有SEQIDNO.11所示核苷酸序列的MTHFRA1298C突变纯合子质粒；

其中，质粒载体为pMD18-T质粒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述MTHFRC677T阳性对照品2中所述MTHFRC677T突变纯合子质粒和所述MTHFRC677T野生纯合子质粒的数量比为1:1；所述MTHFRA1298C阳性对照品2中所述MTHFRA1298C突变纯合子质粒和所述MTHFRA1298C野生纯合子质粒的数量比为1:1。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：质控品和空白对照品，所述质控品的序列为：TAYGGTTTGCA。