[发明专利]改进的全生育期人工病圃棉花品种黄萎病抗性鉴定方法

说明书

发明涉及棉花黄萎病鉴定领域，具体涉及改进的全生育期人工病圃棉花品种黄萎病抗性鉴定方法。包括以下步骤：(1)培养鉴定用病原菌，采用玉米沙粒培养基，将沙子和玉米粉按质量比1：1混匀；(2)建立病圃及接种，病原菌接种方法为种沟接种法；(3)调查棉花黄萎病病情；(4)评价棉花品种抗黄萎病性。根据本发明的方法，病圃发病均匀一直，有益于抗病鉴定结果的准确，病情调查分级标准科学、易掌握，充分反应棉花全生育期的抗病性，结果准确，并且，经济、环保。

技术领域

本发明涉及棉花黄萎病鉴定领域，具体涉及改进的全生育期人工病圃棉花品种黄萎病抗性鉴定方法。

背景技术

黄萎病(Verticillium dahliae Kleb.)是棉花生产中的主要病害。20世纪60年代以后，随着棉花面积的扩大，引种和调种频繁，棉花黄萎病开始扩展蔓延，而且日益严重。有效控制黄萎病危害是棉花高产、稳产的关键，种植抗病品种是控制其危害的最经济有效措施，而选育抗病品种的核心是准确评价品种的抗病性。

棉花品种抗黄萎病性鉴定方法分为苗期鉴定方法和成株期鉴定方法。苗期鉴定方法虽然快捷，但鉴定过程中进行了人为的伤根，其鉴定结果仅能体现品种的苗期抗性，与品种的真实抗性存在差异。由于棉花黄萎病是一种成株期病害，发生危害期为棉花的现蕾初期到收获期，且不同品种对黄萎病的抗性与生育期相关，采用成株期鉴定能更真实反应棉花品种的抗黄萎病性。目前，成株期鉴定一般采用重病田或人工病圃，重病田鉴定由于不能控制病原菌的数量、发病不均匀等问题，只能用于育种材料的初筛，人工病圃成株期鉴定方法是对品种进行把关鉴定最可靠方法，并于2009年发布实施了国家标准GB/T 22101.5-2009。然而，人工病圃成株期鉴定方法的准确性和稳定性仍亟待提高。

发明内容

本发明的发明人为解决上述技术问题，从接菌量和接种方法、病害分级方法和结果评价方面改进现有的棉花品种鉴定方法，提出并完成本发明。

在抗病鉴定的过程中，人工病圃成株期鉴定方法存在一些较突出的问题：①建立人工病圃必要的接种技术不成熟，主要是接菌量不精确(每公顷450kg-750kg)、接菌方法不科学，大面积撒施菌种，然后翻耕，容易出现菌种分布不均匀的现象，最终导致发病不均匀；②病害调查的分级标准不科学，病害严重度与产量损失之间关系不密切，不能反应品种对病害的耐受性和抗病性；③抗病性评价方法不科学，依据发病高峰期一个点的病情指数评价品种的抗病性，不能体现棉花品种整个生育期的抗病性。

根据本发明的改进的全生育期人工病圃棉花品种黄萎病抗性鉴定方法，包括以下步骤：

(1)培养鉴定用病原菌

在超净台上，将分离纯化的棉花黄萎病菌，从马铃薯琼脂培养基(PDA)平板上的菌落边缘挑取2mm²的新鲜菌块，接种到查比克液体培养基(NaNO₃，2.00g； K₂HPO₄，1.00g；KCI，0.50g；MgSO₄·7H₂O，0.50g；FeSO₄，0.01g；蔗糖30.00g；用水定容至1000ml)中，置于25℃下，150r/min，黑暗培养6d备用。制作玉米沙粒培养基，具体为将沙子和玉米粉按质量比1：1混匀，加入质量比12％的水，取300g 装入1000ml的克氏瓶，0.1MPa，高压湿热灭菌30min，冷却到室温备用；吸取上述液体培养的棉花黄萎病菌菌液15ml转接至装有玉米沙粒培养基的克氏瓶中，随后放入到25℃培养箱中静置培养7d，待黄萎病菌的菌丝布满后，将培养物掏出，自然条件下风干备用。

(2)建立病圃及接种