[发明专利]桑叶中单宁的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物有效成分分析技术领域，特别是涉及一种桑叶中单宁的检测方法。

背景技术

单宁是多酚中高度聚合的化合物，含有许多酚羟基结构，相对份子质量为500-4000，可以和蛋白质、生物碱、多糖及多种金属离子发生络合反应，已广泛应用于医药、食品、制革、日用化学品、水处理等领域。单宁具有较强的化学和生理活性，对生物体的影响具有双重性，食物中的单宁过量会产生比如减少蛋白质、维生素的有效吸收等抗营养的作用。

桑叶是桑树的主要产物，约占地上部产量的64％，卫生部于1993年将桑叶列为药食两用植物。桑叶蛋白质的氨基酸组成大体与脱脂大豆粉一致，经过适宜的加工，桑叶可以作为反刍和单胃动物的饲料，具有替代能量饲料和蛋白质饲料的功能。我国桑树种植面积约100万公顷。近年来随着丝织品市场疲软，桑蚕业比较效益不佳.桑树的传统用途受到了挑战。据统计有近1/3的桑园已经废弃。提高桑叶综合利用价值，是切实发挥桑树经济林木经济效益，增加农民收入的重要途径。桑叶中含有抗营养因子(anti—nutrion factor，ANF)，其中单宁是桑叶的抗营养因子之一，且桑叶中含有较丰富的单宁。

近十多年来，植物单宁的性质和应用引起了国内外的广泛关注。随着研究的不断深入，迫切需要对单宁进行准确的定性和定量分析。单宁的定量检测方法很多，经典的有皮粉法、干酪素法、氧化滴定法、分光光度法等；现阶段涌现出许多新型的测定方法，如高效液相色谱法、流动注射分析法、原子分光光度法等。单宁的经典测定方法大多数比较冗繁、精确度 低。

高效液相色谱法(HPLC)是20世纪60年代后期发展起来的一种分析方法。近年来，在保健食品功效成分、营养强化剂、维生素类、蛋白质的分离测定等应用广泛。郭佳莉等采用Hypersil ODS(125×4.0mm，5μm)色谱柱，检测波长275nm，流动相为80％甲醇和20％水，流速为0.5mL·min^-1测定余甘子中单宁酸的含量，相关系数达99.996％以上，但本试验前期采用此色谱条件分离单宁标准品，检测桑叶中的单宁没有得到很好的分离效果。到目前为止，尚无有关快速测定桑叶中单宁含量方法的研究报道。

发明内容

针对上述存在的技术问题，本发明提供一种桑叶中单宁含量的检测方法，该方法操作简单，精确度高。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

桑叶中单宁的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，所述高效液相色谱法进行检测采用的色谱柱为硅胶填料的色谱柱。

进一步，所述的检测方法，所述高效液相色谱法采用的流动相是采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，所述的流动相A为1.0±0.05％的磷酸溶液，所述的流动相B为甲醇。

进一步，所述的检测方法，所述高效液相色谱法采用紫外检测器测定，所述紫外检测器测定波长为276nm。

进一步，所述的检测方法，所述流动相的流速为0.9-1.1ml/min。

进一步，所述的检测方法，所述流动相A与流动相B的体积比为0-90：10-100。

进一步，所述的检测方法，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，所述梯度洗脱条件：0min，流动相A与流动相B的体积比为90：10；5min，流动相A与流动相B的体积比为30：70；15min，流动相A与流动相B的体积比 为60：40。

进一步，所述的检测方法，所述流动相B中还含有磷酸。

进一步，所述的检测方法，所述流动相B中磷酸的体积分数为1.0±0.05％。

进一步，所述的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，所述高效液相色谱法具体步骤为：

(1)取单宁标准品，采用稀释液溶解制备已知浓度的单宁标准溶液，根据单宁标准溶液，进样分析，以峰面积对应单宁浓度进行线性回归，得到标准曲线；

(2)取桑叶样品，采用稀释液溶解，过滤得到桑叶提取物，进样分析，得到桑叶提取物的峰面积，根据步骤(1)所得的标准曲线得到桑叶样品中单宁的含量；所述步骤(1)与步骤(2)的稀释液为甲醇水溶液。

本发明的方法操作简单，精确度高，可以快速检测出桑叶样品中单宁的含量，为桑叶的利用提供有参考价值的数据。

附图说明

图1单宁标准品色谱图。

图260μg/mL的单宁标准品的色谱图。

图3为单宁标准曲线、回归方程及相关系数。

图4桑叶样品中单宁酸图谱。