[发明专利]由双孢蘑菇罐头加工废水中提取纯化的活性多糖及其提取纯化工艺和应用

权利要求书

1.一种由双孢蘑菇罐头加工废水中提取纯化的活性多糖Abnp1001，其特征在于：它的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖以及半乳糖，且阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖以及半乳糖的摩尔比为39.4:10.3:3.9:17.2:27.4。

2.一种由双孢蘑菇罐头加工废水中提取纯化的活性多糖Abnp1002，其特征在于：它的单糖组成为阿拉伯糖、木糖、甘露糖以及葡萄糖，且阿拉伯糖、木糖、甘露糖以及葡萄糖的摩尔比为0.13:0.56:1.57:87.1。

3.一种活性多糖的提取纯化工艺，其特征在于：它包括以下工艺步骤：

(1)材料预处理：收集蘑菇罐头加工过程中产生的工业废水，然后对该工业废水进行旋转蒸发浓缩，浓缩至溶液折光率达到35～55％，得到蘑菇预煮浓缩液；量取单位体积的蘑菇预煮浓缩液，在蘑菇预煮浓缩液中加入等体积的去离子水进行混合，混合后在65-75℃水浴条件下将蘑菇预煮浓缩液中析出的晶体完全溶解，溶解之后离心机离心，离心机的转速控制在11500-12500rpm之间，离心温度为15-25℃，离心时间为10-20min，离心之后取上清液，上清液用90-150KDa的超滤膜超滤，将超滤得到的截留液，按体积比为1:3.5-1:2.5的比例加入乙醇，在室温下醇沉过夜，醇沉得到的沉淀用50～100ml去离子水溶解，并于65-75℃减压蒸馏除去乙醇，再次离心机离心，离心机的转速控制在11500-12500rpm之间，离心温度为15-25℃，离心时间为10-20min，收集上清液，即得到不小于100KDa的粗多糖Abcp，采用苯酚-硫酸法测Abcp的多糖含量，3.5-5℃保存备用；

(2)离子交换柱层析：

a.DEAE-52预处理：将DEAE-52进行酸、碱预处理；

b.经柱层析得Abnp100；

(3)Abnp100的SephadexG-200凝胶柱层析：

a.SephadexG-200预处理；

b.经柱层析得活性多糖。

4.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺，其特征在于：步骤(2)中DEAE-52预处理的具体过程为：在DEAE-52中加入蒸馏水，浸泡过夜后抽滤，先用0.45-0.55mol/L的NaOH-NaCl碱洗，用蒸馏水洗至中性；用0.45-0.55mol/L的HCl酸洗，用蒸馏水洗至中性；用0.45-0.55mol/L的NaOH-NaCl浸泡，最后用蒸馏水洗至中性即可。

5.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺，其特征在于：步骤(2)的b工艺具体为：将预处理后的DEAE-52进行沸水浴脱气，脱气时间为10-20min,脱气之后冷却装柱，用0.015-0.025mol/L、pH为7.1-7.3的Tris-HCl缓冲液洗至分层明显，之后注入DEAE-Sephadex-A50，将层析柱连接到组合紫外检测仪和HW-2000色谱工作站，定时为5～20min/管，用0.015-0.025mol/L，pH为7.1-7.3Tris-HCl缓冲液洗平衡后上Abcp，待Abcp进入DEAE-52的界面时，开始平衡洗脱，先用0.015-0.025mol/L，pH为7.1-7.3的Tris-HCl缓冲液洗脱平衡，收集主峰A的洗脱液，用4.5-5.5KDa超滤膜超滤主峰A的洗脱液，将超滤得到的截留液进行离心机离心，离心机的转速控制在11500-12500rpm之间，离心温度为15-25℃，离心时间为10-20min，收集上清液，此即为中性粗多糖Abnp100。

6.根据权利要求3所述的活性多糖的提取纯化工艺，其特征在于：步骤(3)中所述的SephadexG-200预处理的具体工艺为：将SephadexG-200干胶浸泡在蒸馏水中，不断搅拌，放置于室温下膨胀45-50h，并除去表面的碎片和沉降缓慢的细小颗粒，之后利用真空干燥器除尽凝胶液中的空气。