[发明专利]一种葡萄糖基转移酶基因及其制备方法和重组工程菌及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种来源于野油菜黄单胞菌野油菜致病变种（Xanthomonascampestrispv.campestris）的一种葡萄糖基转移酶基因，所述的葡萄糖基转移酶基因的核苷酸序列为SEQIDNo.1。

2.权利要求1所述基因编码的蛋白质，其特征在于该蛋白质的的氨基酸序列为SEQIDNo.2。

3.权利要求1所述基因的制备方法，其特征在于该方法采用一步法克隆试剂盒（OneStepCloningKit）进行克隆，将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点；其引物设计总的原则是：通过在引物5’端引入线性化克隆载体末端同源序列，使得插入片段扩增产物5’和3’最末端分别带有和线性化克隆载体两末端对应的完全一致的序列。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于所述的引物为：

agl-one-step-F：5’-GAAGGAGATATACCATGTCGCAGACACCATG-3’；agl-one-step-R:5’-AGTGCGGCCGCAAGCTTCAGCCACGACCGAC-3’。

5.权利要求1所述基因的重组工程菌。

6.根据权利要求5所述的重组工程菌，其特征在于重组载体为pET28a。

7.根据权利要求5所述的重组工程菌，其特征在于工程菌宿主选用大肠杆菌Rosetta?(DE3)[F?ompThsdSB(rB?mB?)galdcm(DE3)pRARE2(CamR)]。

8.权利要求5所述的重组工程菌的构建方法，其特征在于该重组工程菌的载体用NdeⅠ和HindⅢ双酶切线性化后，将两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后，在重组酶Exnase的催化下，在37℃下反应30min重组完全，完成定向克隆。

9.权利要求5所述的重组工程菌诱导剂葡萄糖基转移酶的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：重组工程菌接种至含有卡那霉素和氯霉素的LB培养基中过夜培养10-12h，再以1~3%的接种量转接至同上的LB培养基中，当转接2-3h后，加入终浓度为0.1-10g/L的乳糖，放到20-30℃的摇床上，诱导表达8~15h，高效表达葡萄糖基转移酶。

10.一种葡萄糖基转移酶催化对苯二酚生成α-熊果苷的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：将权利要求5所述的重组工程菌经培养离心获得的湿菌体，使其破碎离心液作为催化剂，以1%-2%对苯二酚为底物，10%-40%麦芽糖为辅助底物，在pH7.0的100mM磷酸钠缓冲液中，在180rpm，30℃条件下反应24h。