[发明专利]用于前列腺细胞培养的前列腺细胞外基质凝胶

权利要求书

1.一种用于前列腺细胞培养的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于，所述前列腺细胞外基质凝胶的制备方法包括以下步骤：

A.前列腺细胞外基质的制备：无菌条件下取雄性成年哺乳动物膀胱组织切片，切片的规格为1cm×1cm×0.5cm；取切片10片，加入5-15mL浓度为9-11kIU/mL的抑肽酶溶液，于4℃条件下搅拌45-55h；接着在5-10mL质量分数为0.85-1.2％的聚乙二醇辛基苯基醚溶液中于4℃条件下搅拌20-30h；然后在5-10mL质量分数为0.75-1.5％的十二烷基硫酸钠溶液中于4℃条件下搅拌20-30h；再在5-15mLDNA水解酶的浓度为45-55U/mL、RNA酶A的浓度为0.5-1.5U/mL的溶液中在4℃条件下搅拌20-28h；用1×PBS缓冲液清洗三次，每次5min，冷藏、在真空条件下冷冻干燥通过10-15kGyCo⁶⁰辐照杀菌，并置于-20℃条件下存放；

B.前列腺细胞外基质凝胶的制备：将步骤A所得样品于-80℃冷冻，然后用冷冻研磨机研磨45-60h成为粉末，取1g研磨后粉末和100mg胃蛋白酶混合在100mL的0.01mol/L盐酸溶液中，室温搅拌40-55h，将混合物在4℃条件下移至离心管中，在转速3000r/min条件下离心15min；收集上清液，过滤，取过滤后溶液置于-80℃条件下储存直至进一步使用；再在4℃条件下加入15mL10×PBS缓冲液，用0.01nmol/LNaOH溶液将过滤后溶液的pH值调至7.4，置于37℃条件下孵育30min得到前列腺细胞外基质凝胶。

2.根据权利要求1所述的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于：步骤A中所述抑肽酶溶液的浓度为10kIU/mL，体积为8mL，在该溶液中的搅拌时间为48h。

3.根据权利要求1所述的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于：步骤A中所述聚乙二醇辛基苯基醚溶液的质量分数为1％，体积为5mL，在该溶液中的搅拌时间为24h。

4.根据权利要求1所述的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于：步骤A中所述十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为1％，体积为7.5mL，在该溶液中的搅拌时间为24h。

5.根据权利要求1所述的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于：步骤A中所述DNA水解酶和RNA酶A的浓度分别为50U/mL和1U/mL，该含有DNA水解酶和RNA酶A的溶液的体积为10mL，在该溶液中的搅拌时间为24h。

6.根据权利要求1所述的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于：步骤A中所述Co⁶⁰辐照杀菌的强度为12kGy。

7.根据权利要求1所述的前列腺细胞外基质凝胶，其特征在于：步骤B中所述过滤步骤所用过滤器为0.2mm的针头式过滤器。

8.权利要求1所述的前列腺细胞外基质凝胶的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：将1×10⁴个前列腺细胞与100μL前列腺细胞外基质凝胶混合均匀，加入24孔板孵育30min，然后加入培养基，在CO₂体积分数为5％、空气体积分数为95％的气体环境进行培养，每2天更换培养基1次。

9.根据权利要求8所述的前列腺细胞外基质凝胶的使用方法，其特征在于：所述培养基为角质形成细胞无血清培养基。

10.权利要求1-7任一项所述前列腺细胞外基质凝胶在人体前列腺上皮细胞培养中的应用。