[发明专利]一株枯草芽孢杆菌及其在降解有机磷农药中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株枯草芽孢杆菌及其在降解有机磷农药中的应用。

背景技术

农药的长期施用已使土壤环境受到普遍污染。进入土壤中的有机农药能够被植物吸收并在植物体内迁移、代谢和积累，对人体健康和生态安全造成严重威胁，中国农药使用量达3×10⁵t/a，除了30％～40％被作物吸收外，大部分多余的农药进入了环境及农产品中，而一些化学性质稳定，长期残留的农药，施用后又给土壤带来了污染，这些污染对人类的健康起到了危害的作用。因此有机农药在土壤中的污染状况及其环境行为已引起各国学者的广泛关注。

有机磷农药在国内外农业中作为主要的杀虫剂，得到了广泛使用。由于其大多属于中高毒性农药，且多具有内吸毒性，在环境中残留量大，难以被微生物降解，在保护农作物的同时，也造成环境的严重污染，并且已经危及到人体健康。其中，氧化乐果是一种具有广谱、内吸等特点的高效、中高毒性的有机磷农药，目前在我国农业中，尤其是果园和菜园中施用比较普遍，其销售量位于有机磷农药的前10位，对土壤生态环境具有较高的危害性。

农药在土壤中的降解作用是土壤中农药消失的主要途径，是土壤净化功能的重要表现，包括光降解、化学降解和微生物降解等作业，但其中由微生物引起的微生物降解作用尤为重要。目前，国外许多专家学者着力于研究有机磷农药的生物降解技术，国内也有许多有机磷农药降解技术以及降解微生物筛选方面的研究报道，例如在敌敌畏、敌百虫、以及甲基对硫磷等常用有机磷农药的微生物降解技术方面有较详细的报道。但在对氧化乐果降解方面未见有枯草芽孢杆菌的报道。

因此，筛选出能够高效降解农田内有机磷农药残留的枯草芽孢杆菌新菌株，对于解决农药污染问题具有较大的现实意义。

发明内容

针对上述现有技术，本发明的目的是提供一株枯草芽孢杆菌及其在降解有机磷农药中的应用。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

一株枯草芽孢杆菌，其为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BLCC1-0388，已于2015年08月26日保藏于位于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏编号为CCTCCNO:M2015503。

本发明的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)BLCC1-0388的菌学特征如下：镜检为好氧革兰氏阳性杆菌。长2.0～3.0微米、宽0.5～0.8微米，无荚膜，有芽孢；在酵母膏蛋白胨培养基上粗糙，菌落淡黄色，表面褶皱，无光泽，边缘波状。

接触酶试验为阳性，氧化酶试验为阴性，V-P测定为阳性，吲哚试验为阴性，水解明胶试验为阳性，硝酸盐还原试验为阴性，明胶液化试验为阴性；苯丙氨酸脱氨酶试验为阴性；D-葡萄糖为阳性、L-阿拉伯糖为弱阳性、D-甘露醇为阳性、木糖为弱阳性；耐盐性和需盐性：2％氯化钠为阳性、5％氯化钠为阳性、7％氯化钠为阳性、10％氯化钠为阴性；柠檬酸盐试验为阳性。

本发明还提供了该枯草芽孢杆菌BLCC1-0388在降解有机磷农药的应用，尤其是在降解氧化乐果中的应用。

本发明还保护一种产品，其活性成分为枯草芽孢杆菌BLCC1-0388或其发酵产物。

优选的，该产品为菌粉或液体菌剂。

本发明还提供该产品的制备工艺，将枯草芽孢杆菌BLCC1-0388的种子液接种于液体发酵培养基中，发酵培养，待发酵液芽孢率达到90％以上时，收集发酵液，制成液体菌剂或菌粉。

所述枯草芽孢杆菌BLCC1-0388的种子液的制备方法，步骤如下：

(i)斜面培养：将枯草芽孢杆菌BacillussubtilisBLCC1-0388的冻干粉菌种接种于固体斜面培养基上，在30℃-37℃培养20～28h；

(ii)一级种子培养：取培养好的斜面，在无菌条件下用接种环接两环于50mL～100mL种子液体培养基中，在30℃-37℃条件下，摇床培养20-24h，制得一级种子液；

(iii)扩大培养：以4-6％(v/v)的接种量，将一级种子液接于500mL～1000mL种子液体培养基中，在30℃-37℃条件下，摇床培养20-24h，制得二级种子液；

上述步骤(ii)、(iii)中所述种子液体培养基配方为：葡萄糖20g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L，氯化钠5g/L，使用时，调节pH至6.5～7.5，121℃条件下灭菌20min；

步骤(i)中所述固体斜面培养基为上述种子液体培养基中添加质量分数为1.5～2.0％的琼脂粉。