[发明专利]2’-终止子有关的焦磷酸解作用激活的聚合

权利要求书

1.从寡核苷酸去除2’-终止子核苷酸的方法，该方法包含：

与下述物质一起温育至少一种靶核酸：

焦磷酸；

至少包含焦磷酸解作用活性的第一种生物催化剂，和

至少一种包含2’-终止子核苷酸的寡核苷酸，该寡核苷酸与靶核酸的至少第一个子序列至少部分地互补，

所述温育在第一种生物催化剂从寡核苷酸去除至少2’-终止子核苷酸以生成去除的2’-终止子核苷酸和缩短的寡核苷酸的条件下进行，从而从寡核苷酸去除核苷酸，

其中所述第一种生物催化剂具有校正3’-5’外切核酸酶活性。

2.权利要求1的方法，其中所述寡核苷酸包含在寡核苷酸的3’-末端的2’-终止子核苷酸。

3.权利要求1的方法，其中所述2’-终止子核苷酸不可被一种或多种选自下述的核苷酸掺入生物催化剂延伸：G46EE678GCS5DNA聚合酶，G46EL329AE678GCS5DNA聚合酶，G46EL329AD640GS671FCS5DNA聚合酶，G46EL329AD640GS671FE678GCS5DNA聚合酶，G46EE678GCS6DNA聚合酶，ΔZO5R聚合酶，E615GTaqDNA聚合酶，黄栖热菌(Thermusflavus)聚合酶，TMA-25聚合酶，E678GTMA-25聚合酶，TMA-30聚合酶，E678GTMA-30聚合酶，TthDNA聚合酶，栖热菌属(Thermus)物种SPS-17聚合酶，E615GTaq聚合酶，栖热菌属ZO5R聚合酶，T7DNA聚合酶，KornbergDNA聚合酶I，克列诺DNA聚合酶，TaqDNA聚合酶，微球菌DNA聚合酶，αDNA聚合酶，反转录酶，AMV反转录酶，M-MuLV反转录酶，DNA聚合酶，RNA聚合酶，大肠杆菌(E.coli)RNA聚合酶，SP6RNA聚合酶，T3RNA聚合酶，T4DNA聚合酶，T7RNA聚合酶，RNA聚合酶II，末端转移酶，多核苷酸磷酸化酶，掺入核糖核苷酸类似物的DNA聚合酶，和掺入核糖核苷酸的DNA聚合酶。

4.权利要求1的方法，其中所述第一种生物催化剂包含核苷酸掺入活性，且其中所述方法包含，与第一种生物催化剂、缩短的寡核苷酸和至少一种其它核苷酸一起温育靶核酸，所述温育在第一种生物催化剂将其它核苷酸掺入缩短的寡核苷酸的末端以生成延长的寡核苷酸的条件下进行；或者其中所述方法包含，与至少包含核苷酸掺入活性的第二种生物催化剂、缩短的寡核苷酸和至少一种其它核苷酸一起温育靶核酸，所述温育在第二种生物催化剂将其它核苷酸掺入缩短的寡核苷酸的末端以生成延长的寡核苷酸的条件下进行。

5.权利要求4的方法，其中所述第一种和/或第二种生物催化剂包含选自下述的酶：聚合酶和反转录酶。

6.权利要求1的方法，其中所述2’-终止子核苷酸包含式：

其中

Z是O或CH₂；

B是至少一个同素环、至少一个杂环、至少一个芳基或其组合；

BG是封闭基团；

R₁是OH；

且，

代表单键或双键；且

其中BG选自：CN、NO₂、磷酸基团、醛基团及其组合。

7.权利要求6的方法，其中BG包含磷酸基团，所述磷酸基团包含式：

或

其中

Q是O、S或NH；

X是H、OH、CH₃、BH₃、F或SeH；且，

Z是O、S或Se；

或

其中

Q是O、S或NH；

X是O、S或NH；

Z是O、S或Se；且，

R是烷基、链烯基或炔基；或

其中

Q是O、S或NH；

X是O、S或NH；

Z是O、S或Se；

L是-CONH(CH₂)_nNH-、-CO(CH₂)_nNH-或-CONH(CH₂CH₂O)_nCH₂CH₂NH-；

n是大于0的整数；且，

R是NH₂、SH、COOH、猝灭剂部分、报道部分、生物素或亲和部分。